鸡γ-干扰素基因在昆虫细胞/杆状病毒载体系统中的表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王海艳

作者： 王海艳;刘胜旺;孔宪刚;赵振华

作者机构：

关键词： 鸡IFN-γ;昆虫细胞/杆状病毒;重组蛋白

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1006-1304

年卷期： 2004 年 12 卷 06 期

页码： 23-27

收录情况： CSCD

摘要： 将鸡(Gallus gallus)的γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)基因亚克隆到杆状病毒转移载体pMelBacB的BamH I位点上,构建真核转移载体pMelBacB-ChIFN-γ,经限制性内切酶消化、ChIFN-γ特异引物PCR鉴定和序列测定,证明目的基因正确克隆到载体的预期位点。将纯化的pMeiBaeB-ChIFN-γ质粒与杆状病毒DNA(Bac-N-Blue~(TM)DNA)共转染sf9昆虫细胞,经3轮蓝斑筛选纯化,获得了重组杆状病毒rBaculovirus-ChIFN-γ。提取病毒DNA经ChIFN-γ特异引物和重组杆状病毒特异引物PCR鉴定,证明获得了纯化的重组杆状病毒,命名为rBaculovirus-ChIFN-γ。用该重组病毒接种sf9昆虫细胞,收获接种后不同时间的细胞进行SDS-PAGE,结果表明ChIFN-γ基因在昆虫细胞中获得了表达,表达的重组蛋白分子量约为19 kD。应用在大肠杆菌(Escherichia coil)原核表达系统中表达的重组蛋白制备的兔抗ChIFN-γ多克隆抗体进行Western blot分析,表明表达的重组蛋白具有抗原性。

分类号： S852.4

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