CTAB选择性沉淀和纯化质粒DNA工艺的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张泉

作者： 张泉;于可响;袁维峰;薛方明;孙怀昌;朱鸿飞

作者机构：

关键词： 十六烷基三甲基溴化铵;质粒DNA;纯化;质量检测

期刊名称： 生物工程学报

ISSN： 1000-3061

年卷期： 2008 年 24 卷 12 期

页码： 2117-2121

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 通过直接在大肠杆菌碱裂解上清中加入十六烷基三甲基溴化铵(CTAB),优化CTAB与质粒DNA量的比例、质粒DNA选择性释放溶液的选择和TritonX-114的使用,建立了简单、易行的大规模质粒DNA纯化工艺。纯化质粒DNA的质量检测结果显示,CTAB纯化的质粒DNA无菌体RNA污染,菌体基因组DNA、内毒素和蛋白含量分别小于100ng/mg、50EU/mg和10μg/mg质粒DNA,OD260/OD280比值介于1.75~1.85之间,超螺旋质粒DNA的比例大于80%,该工艺纯化的质粒DNA能达到或接近FDA规定的人用质粒DNA的各项指标,整个过程不使用动物源性酶和苯酚、氯仿、无水乙醇等有毒或易燃、易爆试剂,成本低廉,工艺环保。

分类号： Q78

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