禽流感病毒B类等位基因NS1蛋白的原核表达、纯化及热稳定性分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 罗维玉

作者： 罗维玉;胡永浩;张杰;王金光;朱鹏阳;梁立滨;周圆;李呈军;姜丽

作者机构：

关键词： 禽流感病毒;NS1蛋白;原核表达纯化;热稳定性

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1674-7968

年卷期： 2016 年 24 卷 10 期

页码： 1482-1490

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： A型流感病毒的非结构蛋白基因(non-structural protein,NS)在进化上可以分为等位基因A和B,两者之间同源性低于70%;NS1是流感病毒对抗宿主免疫系统的主要毒力因子之一。本研究在序列比对分析的基础上,表达、纯化了本实验室保存的4株B类等位基因禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)(A/duck/Hunan/S1256/12(H3N8),A/environment/Hunan/S4484/11(H12N7),A/duck/Guangdong/07/00(H5N1)和A/duck/Shanghai/08/01(H5N1))的NS1蛋白,并对其进行稳定性分析。首先从感染的鸡胚尿囊液中提取病毒总RNA,利用特异引物Uni12反转录获得c DNA,以其为模板PCR扩增得到NS1全长片段,利用Bam HⅠ和NotⅠ双酶切将其定向插入p GEX6P-1载体,大肠杆菌(Escherichia coli)BL21菌株中诱导表达。该蛋白在纯化过程中稳定性差,沉淀析出。为此,进一步构建NS1蛋白截短突变体(1M-202A,R38A/K41A),并在BL21菌株中诱导表达,经过GE health Glutathione sepharose 4B亲和层析、Source Q阳离子交换柱层析和Hitrap Superdex75分子筛凝胶层析逐步纯化,然后进行SDS-PAGE凝胶纯度分析,并测定OD320,进行蛋白热稳定性分析。结果表明,经进化分析,4株病毒均属于禽流感病毒B类等位基因群,4株病毒NS1蛋白经过全长野生型、全长突变体及截短突变体的逐步优化表达,截短突变体NS1蛋白表达质量相对较高,最终经过逐步纯化获得纯度达到90%以上的蛋白样品,且4株病毒中A/duck/Hunan/S1256/12(H3N8)NS1蛋白的稳定性最好。研究结果为进一步研究其分子结构与功能提供了基础资料。

分类号： S852.65

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