中国林蛙抗菌肽Temporin-1 CEa基因的真核表达载体构建

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张志崇

作者： 张志崇;王春生;张秋婷;朴善花;苗向阳;安铁洙

作者机构：

关键词： 中国林蛙;抗菌肽;绵羊成纤维细胞;瞬时表达

期刊名称： 经济动物学报

ISSN： 1007-7448

年卷期： 2012 年 16 卷 01 期

页码： 30-34

摘要： 为了建立大量获取中国林蛙抗菌肽的方法,根据GenBank中的中国林蛙皮肤抗菌肽Temporin-1CEa基因的mRNA序列(EU624139)设计一对特异性引物,以提取的中国林蛙皮肤总RNA反转录出的cDNA为模板,将扩增的编码序列与pEASY-T3克隆载体连接获得Tem-T3;利用酶切、连接等分子生物学手段,将GFP基因连入Tem-T3克隆载体,再经酶切获得Tem-GFP片段,并插入真核表达载体pcDNA3.1,最终得到Tem-GFP-pcD-NA3.1重组质粒;利用脂质体转染法将该质粒转入绵羊成纤维细胞,48 h后可在荧光倒置显微镜下观察到GFP的绿色荧光表达;qPCR数据分析显示,与对照组相比,转染Tem-GFP-pcDNA3.1的绵羊成纤维细胞中融合蛋白Tem-GFP的表达量可提高约300倍。本研究为构建Temporin-1CEa基因山羊乳腺特异表达载体提供依据。

分类号： Q78

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