Myostatin基因沉默绵羊成纤维细胞系的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 唐大运

作者： 唐大运;朱化彬;吴健敏;杜卫华;王栋;赵学明;陈汉忠;林秀坤

作者机构：

关键词： 肌肉生长抑制素;RNA干扰;慢病毒;绵羊成纤维细胞

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2011 年 42 卷 10 期

页码： 1368-1373

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 旨在获得肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)基因沉默的成纤维细胞系,为进一步探索Myostatin的调控机理,获得Myostatin的基因沉默的转基因羊奠定基础。针对小尾寒羊Myostatin的基因序列,设计4条siRNA干扰序列,构建pSilencer干扰载体,转染成纤维细胞,采用RT-PCR进行筛选;构建慢病毒干扰载体,包装病毒,感染成纤维细胞,采用流式细胞技术分选阳性细胞,阳性细胞予以测序鉴定并检测沉默效果。结果,获得Myostatin基因沉默效率约90%的RNA干扰片段PSL1,包装病毒获得滴度为1×108的病毒颗粒,流式细胞技术分选得到纯度达99%的Myostatin基因沉默成纤维细胞系。采用慢病毒感染接合流式细胞术分选,能较快获得无抗性标记的转基因阳性细胞系,为培育Myostatin基因沉默的转基因羊及探索Myostatin的调控机理奠定基础。

分类号： S826

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