利用CRISPR/Cas9技术构建流感病毒高产细胞系MDCK-Tpl2-/-

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘赛宝

作者： 刘赛宝;李亚芳;王辉;王伟;冉多良;陈洪岩;孟庆文

作者机构：

关键词： Tpl2;CRISPR/Cas9;MDCK-Tpl2-/-细胞;细胞质控;禽流感病毒

期刊名称： 中国生物工程杂志

ISSN： 1671-8135

年卷期： 2019 年 001 期

页码： 166-174

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： Tpl2是调节I型(IFNα/β)和II型(IFNγ) IFN的关键调控因子,对病毒感染期间产生有效免疫应答至关重要.为了建立支持流感病毒高效繁殖的新型MDCK细胞系,利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建Tpl2基因敲除的MDCK细胞,绘制其细胞生长曲线;根据《中国药典》第三部,对细胞进行形态检查、内外源因子和致瘤性检测;流感病毒接种细胞(MOI=0. 1),测定12h、24h、48h、72h细胞培养上清的血凝滴度及72h TCID50滴度.结果:靶基因组测序结果显示,获得一株稳定敲除Tpl2的MDCK细胞(MDCK-Tpl2-/-);其与亲本细胞生长速率无显著差异,均为贴壁、上皮样细胞形态;细胞内细菌、真菌、支原体、病毒及致瘤性检测均为阴性;病毒接种后12h、24h、48h、72h,MDCK-Tpl2-/-细胞培养上清的血凝效价提高了1. 78~2. 5倍.病毒接种后72h,MDCK-Tpl2-/-细胞培养上清病毒的TCID50滴度提高了2. 8倍.结果表明,利用Tpl2缺陷型MDCK细胞系可以提高流感病毒产量,为提升疫苗质量奠定基础.

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