青天葵ISSR-PCR体系优化及引物筛选

文献类型： 中文期刊

第一作者： 周雨晴

作者： 杜沛霖;傅鹏;谢峰;王跃峰;朱华

作者机构：

关键词： 青天葵;简单重复序列区间;体系优化;引物筛选

期刊名称： 中国实验方剂学杂志

ISSN： 1005-9903

年卷期： 2014 年 21 期

页码： 95-99

收录情况： 北大核心

摘要： 目的:建立适合青天葵遗传差异分析的简单重复序列区间(ISSR)-聚合酶链式(PCR)反应体系。方法:采用正交试验设计对影响青天葵ISSR-PCR反应体系的5种因素(dNTP、模板DNA、引物、Mg2+和Taq DNA聚合酶)4个水平进行优化,并结合新复极差法,对试验中各单因素进行分析。结果:确立了青天葵最佳反应体系,即在20μL的总反应体积中含有10×PCR buffer 2μL,dNTP 225μmol·L-1,Mg2+2.5 mmol·L-1,引物0.4μmol·L-1,Taq DNA聚合酶1.0 U,模板DNA60 ng;从100条引物中筛选出16条扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物。结论:建立的青天葵ISSR-PCR反应体系,经过24份青天葵样品检验,得出该体系稳定可靠,可用于青天葵遗传差异分析。

分类号： S567.239

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