草鱼呼肠孤病毒VP6蛋白在毕赤酵母中表达的初步研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 苏岚

作者： 苏岚;曾令兵;周勇;张辉;高正勇;张金凤

作者机构：

关键词： 草鱼呼肠孤病毒;VP6蛋白;毕赤酵母(Pichia pastoris);表达分析

期刊名称： 淡水渔业

ISSN： 1000-6907

年卷期： 2012 年 42 卷 06 期

页码： 40-44

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 根据GeneBank中草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus,GCRV)104株VP6蛋白的全基因序列(HM234682)设计一对特异引物,以提取的GCRV-104核酸为模板,采用RT-PCR技术扩增VP6蛋白编码基因,并将其克隆到含强启动子AOXⅠ的毕赤酵母(Pichia pastoris)表达载体pPICZB上。重组酵母质粒pPICZB-VP6经SacⅠ线性化,电击转化到毕赤酵母KM71菌株中,Zeocin抗性平板上筛选高拷贝转化子。阳性转化子在30℃,0.5%(V/V)的甲醇添加量的条件下,连续诱导3 d,表达产物经SDS-PAGE和Western-Blotting检测,结果表明成功实现了GCRV-104 VP6蛋白在毕赤酵母中的胞内表达,重组VP6蛋白相对分子质量约46 000,与天然VP6蛋白相对分子质量接近,并且可与鼠抗草鱼GCRV-104 VP6蛋白的多克隆抗体特异性结合。

分类号： S943

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