日本血吸虫TOR真核表达载体的构建及其在293T细胞中的表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 宰金丽

作者： 宰金丽;马帅;王涛;贾秉光;柴淑梅;张倩;林矫矫;傅志强

作者机构：

关键词： 日本血吸虫;TOR蛋白;基因克隆;真核表达

期刊名称： 中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2017 年 25 卷 01 期

页码： 66-71

收录情况： 北大核心

摘要： 本研究扩增到日本血吸虫Sj TOR完整的蛋白编码区并将其克隆到p XJ40-FLAG载体的HindⅢ、XhoⅠ酶切位点,构建真核表达质粒p XJ40-FLAG-TOR。将测序正确的质粒转染到293T细胞中进行表达,然后应用间接免疫荧光、实时荧光定量PCR、Western blot检测其在293T细胞中的表达情况。测序结果表明Sj TOR蛋白编码区为1245 bp,真核表达质粒p XJ40-FLAG-TOR构建成功。转染293T细胞48 h后,应用间接免疫荧光染色可观察到转染重组质粒的细胞有特异性绿色荧光,空质粒对照则未见。实时荧光定量PCR结果显示,在转染质粒p XJ40-FLAG-TOR 6 h后Sj TOR蛋白的基因已有转录,至转染24 h时转录水平最高,随后开始降低。Western blot结果显示Sj TOR蛋白分子量约53 k Da,可被FLAG单抗和抗Sj TOR-ED1抗血清识别。结果表明Sj TOR蛋白可以在293 T细胞中表达,为进一步研究Sj TOR蛋白的生物学功能和DNA疫苗打下了基础。

分类号： R383.24

  • 相关文献

[1]日本血吸虫谷胱甘肽-S-转移酶抗原表位与霍乱毒素B亚基融合蛋白在Bac-to-Bac杆状病毒/昆虫细胞的表达. 徐玉梅,曹士德,朱传刚,张世清. 2019

[2]日本血吸虫胰岛素样多肽的真核表达及其多克隆抗体的制备. 岳生赟,王帅,何伟,王力,刘仲藜,曾巧英,才学鹏. 2017

[3]岭南黄鸡肌生长抑制素基因成熟肽的克隆及酵母表达质粒的构建. 周红蕾,李春玲,王贵平,侯加法. 2008

[4]ApNPV诱导柞蚕脂肪体和中肠组织中3个脂肪酶基因的表达及表达载体构建. 方素云,韩焱,李文利. 2014

[5]刚地弓形虫GJS株微线体蛋白3基因真核表达质粒的构建及在BHK-21细胞中的表达. 张燕丽,曹丽艳,芦赘,苟惠天,王艳华,付宝权,李文卉,张德林. 2009

[6]麦长管蚜Gqα蛋白基因的克隆及昆虫杆状病毒表达载体的构建. 陈巨莲,程登发,孙京瑞. 2007

[7]弓形虫GJS株微线体蛋白3基因真核表达质粒的构建及在BHK-21细胞中的表达. 张燕丽,曹丽艳,芦赟,苟惠天,王艳华,付宝权,李文卉,张德林. 2009

[8]牛轮状病毒结构蛋白VP4基因的真核表达. 王丹,宋玲玲,王洪梅,杨宏军,王立群,何洪彬. 2012

[9]弓形虫GJS株致密颗粒6基因真核表达质粒的构建及在BHK-21细胞中的表达. 张燕丽,曹丽艳,芦赟,蔡志杰,王艳华,付宝权,李文卉,张德林. 2010

[10]猪11β-HSD1真核过表达载体的构建及其在Hepa1-6细胞中的表达. 夏吉瀚,王超群,阮进学,杨述林,李奎. 2012

[11]日本血吸虫中国大陆株21，7kD蛋白编码基因的克隆和表达. 金亚美,林矫矫,张亮,傅志强,吴祥甫,周元聪,蔡幼民. 2002

[12]日本血吸虫中国大陆株22.6kD膜相关蛋白基因的克论. 蔡学忠,林矫矫,杨冠珍,施福恢,沈纬,蔡幼民,吴祥甫. 1999

[13]日本血吸虫Wnt受体蛋白Fz5编码基因的克隆及其在不同发育时期虫体的表达差异. 韩琳,苑纯秀,冯新港. 2008

[14]日本血吸虫中国大陆株22.6kD膜相关蛋白基因的克隆与表达. 蔡学忠,林矫娇,杨冠珍,施福恢,沈纬,蔡幼民,吴祥甫. 1998

[15]日本血吸虫四跨膜孤儿受体(TOR)克隆及其第一个膜外区基因的表达. 马帅,韩艳辉,洪炀,张旻,曹晓丹,韩倩,刘艳涛,陆看,马茜茜,陆珂,贾秉光,林矫矫,傅志强. 2014

[16]日本血吸虫中国大陆株肌动蛋白编码基因的克隆和表达. 朱建国,林矫矫,冯新港,吴祥甫,周元聪,蔡幼民. 2000

[17]日本血吸虫性别差异表达基因的筛选及研究. 夏艳勋,林矫矫,赵传壁,陈益,贺桂芬. 2008

[18]日本血吸虫dysferlin基因的克隆及重组蛋白免疫原性的分析. 熊雅念,魏梅梅,洪炀,黄莉妮,孟培培,艾德宙,韩艳辉,傅志强,林矫矫. 2013

[19]日本血吸虫中国大陆株抱雌沟蛋白编码基因的克隆和表达. 金亚美,林矫矫,冯新港,张亮,吴祥甫,周元聪,蔡幼民. 2002

[20]日本血吸虫四跨膜孤儿受体(TOR)克隆及其第一个膜外区表达. 马帅,韩艳辉,洪炀,曹晓丹,韩倩,陆珂,贾秉光,宰金丽,林矫矫,傅志强. 2015

作者其他论文 更多>>

微信小程序