偶联非洲猪瘟病毒p30蛋白的铁蛋白纳米颗粒制备及免疫原性评价

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张越

作者： 张越;茹毅;郝荣增;杨洋;赵陇和;李亚军;杨锐;卢炳州;郑海学

作者机构：

关键词： 非洲猪瘟;p30蛋白;铁蛋白纳米颗粒;免疫原性

期刊名称： 生物工程学报

ISSN： 1000-3061

年卷期： 2024 年 40 卷 012 期

页码： 4509-4520

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本研究旨在利用铁蛋白制备携带非洲猪瘟病毒 p30 蛋白的纳米颗粒抗原,并对其免疫原性进行评价,为非洲猪瘟纳米疫苗研究提供实验基础.首先,将编码p30 蛋白和SpyTag标签的基因序列融合后插入pCold-I载体,得到pCold-p30 质粒.将编码SpyCatcher与铁蛋白的基因序列融合后插入 pET-28a(+)载体得到 pET-F-np 质粒,并分别在大肠杆菌中诱导表达.然后,将亲和层析纯化后的p30 蛋白与铁蛋白在体外偶联结合,用分子筛纯化后得到偶联 p30 蛋白的铁蛋白纳米颗粒 F-p30,利用粒径仪、透射电镜观察形态结构.将F-p30纳米颗粒蛋白免疫小鼠,评估其体液和细胞免疫应答.结果表明,本研究成功制备出偶联非洲猪瘟病毒p30蛋白的铁蛋白纳米颗粒,颗粒结构约20 nm.F-p30在体外能被小鼠骨髓源树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells,BMDCs)高效摄取,与p30蛋白相比,F-p30 纳米颗粒免疫小鼠诱导产生更高水平的特异性抗体和细胞因子,更有利于刺激淋巴结滤泡辅助T细胞(follicular helper T cell,TFH)、生发中心B细胞(germinal center B cell,GCB)和脾脏CD4+及 CD8+T 淋巴细胞的增殖.综上,本研究成功制备了偶联非洲猪瘟病毒 p30 蛋白的铁蛋白纳米颗粒,能显著增强p30 蛋白的免疫原性,为非洲猪瘟疫苗的研究奠定了基础.

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