栽培远志qRT-PCR内参基因筛选与P450s基因的时空表达分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李娟

作者： 李娟;孔冉冉;梅月菊;张福生;田洪岭;秦雪梅;杜晨晖;马存根

作者机构： 山西药科职业学院药学系;山西大学中医药现代研究中心;山西大学化学化工学院;山西省农业科学院经济作物研究所;山西中医药大学

关键词： 远志;实时荧光定量PCR;内参基因;细胞色素P450单加氧酶;时空表达

期刊名称： 中草药

ISSN： 0253-2670

年卷期： 2019 年 24 期

页码： 6084-6090

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的筛选适用于不同生长年限和不同部位的栽培远志实时荧光定量PCR分析(quantitative realtimePCR,qRT-PCR)的稳定内参基因,为远志体内各个基因表达分析提供合适内参基因。并对4个细胞色素P450单加氧酶(cytochromeP450monooxygenase,P450s)基因在上述远志样品中的差异表达进行分析,明确4个P450s基因在栽培远志中的时空表达分布。方法通过qRT-PCR获取Tubulin 1、Tubulin 2、Elongation 1、Elongation 2、Actin 1、Actin 2、GAPDH和cdc-42 8个候选内参基因在上述远志样品中的熔解曲线与Ct值;利用软件geNorm和Norm Finder对候选内参基因的表达稳定性进行评价;通过qRT-PCR分析4个P450s基因CYP709B2、CYP71AP39、CYP88A85、CYP714E38在上述远志样品中的相对表达情况。结果 geNorm分析结果表明,在远志(1～3年生)根、茎、叶、花中稳定表达的为Tubulin 2与Elongation 1;Norm Finder结果显示,Elongation1是最稳定的内参。CYP709B2、CYP71AP39基因在远志茎、叶(1～3年生)中的m RNA表达量最高,在根与花中的表达量则较少。而CYP88A85、CYP714E38基因则在远志根(1～3年生)中的m RNA表达水平较高。结论 Elongation 1适合作为栽培远志体内基因表达分析的内参基因。栽培远志中的P450s基因在远志根、茎、叶、花中的表达趋势不一致。

分类号： S567.239

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