毛白杨4-CL cDNA的克隆、表达及活性分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 杨向东

作者： 杨向东;王汉中;胡赞民;刘贵华;沈金雄

作者机构：

关键词： 毛白杨;4-香豆酰辅酶A连接酶;原核表达;偏爱性

期刊名称： 华中农业大学学报

ISSN： 1000-2421

年卷期： 2006 年 25 卷 02 期

页码： 101-105

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 从毛白杨(Populus tomentosa)木质化茎中提取总RNA,利用RT-PCR技术进行cDNA扩增,获得1条1 621 bp的片段。测序结果表明:该片段编码536个氨基酸组成的多肽,序列中包含所有已知4-CL蛋白的2个特征序列boxⅠ(SSGTTGLPKGV)和boxⅡ(GEICIRG)。将cDNA克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,并转化大肠杆菌(Escherichia coli)感受态细胞BL21(DE3)。IPTG诱导后,经SDS-PAGE和Western-blot分析表明,4-CL基因在大肠杆菌BL21中获得表达,所表达融合蛋白的分子量约为70 ku。酶活性分析表明:该重组蛋白对底物PA、FA、CA均表现出催化活性,其偏爱性顺序为PA>FA>CA,对SA则没有活性。

分类号： Q943.2

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