结核分支杆菌MPT83蛋白基因在大肠杆菌表达载体中的克隆、表达与鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 尤敏

作者： 尤敏;邓小波;崔尚金

作者机构：

关键词： 结核分支杆菌;MPT83基因;原核表达;SDS-PAGE;Western blotting

期刊名称： 现代预防医学

ISSN： 1003-8507

年卷期： 2008 年 18 期

页码： 3594-3596

收录情况： 北大核心

摘要： [目的]从分支杆菌培养物中提取DNA,扩增结核分支杆菌MPT83蛋白基因,并在大肠杆菌中进行表达、克隆和鉴定。[方法]从分支杆菌培养物中提取总DNA,扩增MPT83因并克隆入T载体,将目的基因插入表达载体pET-32a(+)中,转化BL21宿主菌,IPTG诱导表达构建的表达质粒pET-MPT83经PCR和BamHⅠ+HindⅢ双酶切进行鉴定。[结果]经SDS-PAGE分析,在约42ku处出现新的蛋白条带,5h后表达量即达到高峰;Western blotting分析表明,融合蛋白能够被分支杆菌阳性血清所识别;纯化的表达蛋白经SDS-PAGE电泳,出现清晰的单一条带。表明MPT83基因原核表达载体构建成功。[结论]结核分支杆菌MPT83蛋白基因在大肠杆菌表达载体中的克隆、表达与鉴定,为结核病的诊断以及亚单位疫苗、核酸疫苗的制备和应用奠定基础。

分类号： R346

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