尼罗罗非鱼Ly75基因的克隆、原核表达和多克隆抗体制备

文献类型： 中文期刊

第一作者： 陈琼

作者： 陈琼;曹建萌;卢迈新;胡欣欣;陈昆平;郭富强

作者机构：

关键词： 尼罗罗非鱼;淋巴细胞抗原75;原核表达;多克隆抗体

期刊名称： 生物技术

ISSN： 1004-311X

年卷期： 2017 年 03 期

页码： 223-231

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： [目的]获得尼罗罗非鱼淋巴细胞抗原75(OnLy75)基因的cDNA序列和多克隆抗体。[方法]采用RACE技术克隆OnLy75基因的cDNA全序列,通过DNAMAN、MEGA等软件分析其序列特征;构建OnLy75的原核表达载体,并对其重组蛋白进行原核诱导表达;将纯化后的OnLy75重组蛋白免疫新西兰大耳白兔,并通过Western Blot技术检测多克隆抗体的效果。[结果]OnLy75的cDNA序列全长为6 632 bp,开放阅读框5 199 bp,编码1 732个氨基酸。其OnLy75重组蛋白主要存在于包涵体中;将重组蛋白纯化后免疫新西兰大耳白兔,成功获得了兔抗OnLy75多克隆抗体。用该多抗对尼罗罗非鱼不同器官进行Western Blot内源性检测,结果显示该蛋白在精巢中有丰富的表达。[结论]兔抗OnLy75多克隆抗体的成功制备,为进一步深入研究OnLy75在尼罗罗非鱼组织中的定位及功能研究提供了工具。

分类号： Q78

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