二化螟碱性神经酰胺酶和中性鞘磷脂酶基因RNA干扰技术体系的优化

文献类型： 中文期刊

第一作者： 孙娜

作者： 孙娜;杨琼;韩阳春;张茹;王利华;方继朝

作者机构：

关键词： 二化螟;碱性神经酰胺酶;中性鞘磷脂酶;RNAi;显微注射法;荧光纳米粒子介导喂食法;浸泡法

期刊名称： 昆虫学报

ISSN： 0454-6296

年卷期： 2018 年 08 期

页码： 914-922

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】比较不同方法以及不同靶标基因的RNA干扰(RNA interference,RNAi)效率,建立并优化二化螟Chilo suppressalis碱性神经酰胺酶saCER和中性鞘磷脂酶snSMase基因的RNAi的技术体系。【方法】通过培养液浸泡法将果蝇Drosophila daCER基因的dsRNA导入果蝇S2细胞内;分别通过显微注射法和荧光纳米粒子介导喂食法将体外合成的二化螟saCER和snSMase基因的特异性双链RNA(dsRNA)导入二化螟3龄(注射法)和2龄(喂食法)幼虫体内,之后利用qPCR测定靶标基因的mRNA表达水平,比较不同方法对不同基因的RNA干扰效率。【结果】将果蝇S2细胞浸泡在浓度为15 ng/μL的含daCER dsRNA细胞培养液中培养72 h后,daCER基因的表达水平下降了约84%。dsRNA (5 000 ng/μL)注射二化螟3龄幼虫60 h后对saCER基因的干扰效率达到最高(41%),dsRNA (2 500 ng/μL)注射48 h后对snSMase基因的干扰效率最高(47%);给二化螟2龄幼虫喂食dsRNA(48μg/d)后,分别在第7天和第8天对saCER(32%)和snSMase(52%)基因达到最大干扰效率。对于aCER基因,果蝇S2细胞浸泡法与二化螟注射法和喂食法相比,干扰效率差异极其显著;使用相同方法,对saCER基因和snSMase基因的干扰效率无显著差异;对于二化螟的同一基因(saCER或者snSMase),注射法与荧光纳米粒子喂食法之间干扰效率也无显著性差异。【结论】碱性神经酰胺酶基因和中性鞘磷脂酶基因对导入dsRNA进行RNAi的方法较敏感,本研究建立并优化的显微注射法和荧光纳米粒子介导喂食法RNAi技术体系在鞘脂质代谢酶基因功能的基础研究中具有可行性。注射法和喂食法对二化螟幼虫aCER基因的干扰效率远低于浸泡法对果蝇S2细胞中这一基因的干扰效率,进一步证实二化螟血淋巴中的RNA酶对dsRNA的快速降解以及中肠围食膜的阻隔很大程度上削减了dsRNA进入二化螟细胞内发挥干扰作用。

分类号： S433.4

  • 相关文献

[1]RNAi和取食不同品种水稻后白背飞虱多铜氧化酶4基因的表达差异及生物学效应. 贾浩康,刘玉娣,侯茂林. 2019

[2]四种鳞翅目害虫精氨酸激酶基因的表达谱及基于RNAi的功能分析. 鲁艳辉,白琪,郑许松,田俊策,吕仲贤. 2019

[3]西花蓟马不同RNA干扰技术比较研究. 李恒,周知恩,陈勇,陆承聪,张祥琴,王谅,陈艺欣,田厚军,林硕,张洁,游泳,魏辉. 2019

[4]转基因技术及在狐貉育种中的应用展望. 徐超,赵家平,曹新燕,鲍坤,宋兴超,孙伟丽,李光玉. 2012

[5]不同RNAi方法对飞蝗触角高表达基因沉默效率的比较. 史学凯,张艺伟,朱坤炎,马恩波,张建珍,刘晓健,吴海花. 2017

[6]利用RNAi技术研究松材线虫纤维素酶基因(Bx-eng-1)的功能. 戴素明,成新跃,肖启明,谢丙炎. 2006

[7]恒黏天然橡胶的绿色制备及性能. 祝欣欣,李世昆,赵涛,赵华强,卢娜,桂红星,王洪振. 2021

[8]几种基因转移技术在小麦上的应用. 曾黎琼,程在全,段玉云,寸守铣,徐增富. 2000

[9]马铃薯Y病毒CP基因RNAi载体构建与干涉效果测定. 李奇科,陶刚,邱又彬,邱礽,迟胜起,朱英,刘作易. 2009

[10]干扰环阿乔醇合成酶基因的表达对人参皂苷含量的影响. 赵寿经,安岩,孟洋,何沐阳,曲庆玲,郝东云. 2014

[11]DHAR与草莓AsA积累关系及DHAR RNAi遗传转化研究. 张丙秀,李柱刚,高媛,刘丹,高庆玉. 2012

[12]飞蝗表皮蛋白Obstructor家族基因的分子特性及基于RNAi的功能分析. 王燕,李大琪,刘晓健,李涛,马恩波,范仁俊,张建珍. 2015

[13]饲喂CYP6CM1和Coe1 RNAi双价转基因烟草对Q型烟粉虱抗药性的影响. 常蕾,胡雪虹,杨郁文,陈天子,邓惠清,姜利农,刘正銮,张保龙,王荣富. 2013

[14]RNAi技术及其在畜牧业中的应用前景. 仲明,张宏福,董枫岚,孙绍光,王润平,杨琳. 2006

[15]绵羊FGF5基因的克隆、表达及RNA干扰. 刘伍限,贾斌,石国庆,任建功,刘卡,马润林. 2011

[16]PolⅡ型启动子K14实现组织特异RNAi. 代蓉,沈思军,万鹏程,石国庆,孟庆勇,刘守仁. 2011

[17]应用RNA干扰技术抑制捻转血矛线虫H11基因研究. 张平,何延华,王新华,薄新文,陈南颍,韩猛立. 2013

[18]应用RNA干扰技术对甜菜夜蛾信息素结合蛋白功能的研究. 周耀振,修伟明,董双林. 2009

[19]中国对虾V-ATPase c亚基基因的克隆及其在高pH胁迫下的表达分析. 胡硕,何玉英,李健,张海恩,韩旭. 2019

[20]西花蓟马几丁质合成酶UAP基因克隆及功能分析. 陆承聪,李恒,张祥琴,王谅,陈艺欣,田厚军,林硕,张洁,陈勇,魏辉. 2019

作者其他论文 更多>>

微信小程序