小麦TaPDK基因的序列分析、原核表达及纯化

文献类型： 中文期刊

第一作者： 杨书玲

作者： 杨书玲;张龙雨;张改生;桑青;刘红占;朱启迪;张新钵;赵新亮

作者机构：

关键词： 小麦;TaPDK基因;原核表达;蛋白纯化;Western blot

期刊名称： 核农学报

ISSN： 1000-8551

年卷期： 2013 年 27 卷 08 期

页码： 1081-1089

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为研究TaPDK蛋白在小麦生理型雄性不育过程能量代谢途径中的调控机制。本试验提取小麦花药总RNA并反转录为cDNA,根据GenBank报道的已知小麦PDK基因序列设计引物,扩增TaPDK基因的编码区,采用生物信息学方法对其进行序列分析与功能预测,得出TaPDK的ORF为1095bp,编码364个氨基酸,蛋白分子量为41kD。进一步构建原核表达载体PET23d-PDK,转化到大肠杆菌表达菌种E.coli BL21(DE3)中进行优化表达,融合蛋白经SDS-PAGE电泳和Western blot验证后利用亲和层析柱初步纯化,针对原核表达过程中出现的非特异蛋白,采用切胶处理的方法进行二次纯化。原核表达结果表明IPTG可诱导一个分子量约40kD的特异蛋白,且主要以包涵体的形式存在,优化表达条件为:28℃、0.8mmol.L-1IPTG、150r.min-1诱导表达4h,表达产物经两次纯化得到2mg的目的蛋白,为下一步制备多克隆抗体、寻找互作蛋白奠定基础。

分类号： S512.1

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