抗对硫磷基因工程新型抗体的制备及鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 乔亚奇

作者： 乔亚奇;潘家荣;王磊;于海英;陈明;张维;张付凯

作者机构：

关键词： 对硫磷;链霉亲和素;四价抗体;原核表达

期刊名称： 微生物学报

ISSN： 0001-6209

年卷期： 2010 年 50 卷 5 期

页码： 670-675

收录情况： CSCD

摘要： [目的]提高抗对硫磷抗体的亲和力以提高酶联免疫检测的灵敏度.[方法]本研究通过抗对硫磷单链抗体基因和核心链霉亲和素基因片段的拼接重组,获得了抗对硫磷单链抗体-核心链霉亲和素融合基因(scfv-sα),并将该融合基因(scfv-sα)插入到表达载体pET28α(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行原核表达,制备融合蛋白.SDS-PAGE和Western blot鉴定scfv-sα的表达,Ni~+-NTA亲和层析柱纯化融合蛋白,并用ELISA方法测定该融合抗体的亲和力.[结果]结果表明,在大肠杆菌BL21(DE3)中该融合基因能表达出分子量约为46 kDa的融合蛋白,形成了四价结构域-四价聚合抗体.ELISA测定结果表明该抗体能与对硫磷特异结合,抗体效价在1:1×10~6以上,亲和常数为4.25×10~7L/mol.[结论]制备的抗对硫磷四价聚合抗体能与抗原特异结合,与单克隆抗体相比,抗原结合位点显著增加,ELISA检测灵敏度显著提高.

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