非洲猪瘟病毒Georgia 2007/1株CD2v蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

文献类型： 中文期刊

第一作者： 任肖

作者： 任肖;吴竞;于海男;林伟东;侯绍华;郭晓宇;朱鸿飞

作者机构：

关键词： 非洲猪瘟病毒(ASFV);EP402R基因;CD2v重组蛋白;原核表达;多克隆抗体

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2019 年 12 期

页码： 3698-3706

收录情况： 北大核心

摘要： 本研究旨在通过原核表达系统表达非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)Georgia 2007/1株EP402R基因,获得其编码的CD2v重组蛋白,并针对纯化的CD2v重组蛋白制备多克隆抗体。将ASFV EP402R全长基因进行密码子优化后连入pET-28a(+)表达载体,构建原核重组表达质粒,经1 mmol/L IPTG于16℃诱导12 h后,利用SDS-PAGE和Western blotting对重组蛋白进行表达鉴定和反应原性分析。以纯化的CD2v重组蛋白为免疫原制备鼠源抗CD2v多克隆抗体,随后以间接ELISA方法、间接免疫荧光试验及Western blotting分别检测多克隆抗体的效价和特异性。结果显示,ASFV EP402R基因克隆至pET-28a(+)获得pET-28a-EP402R重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞后经诱导表达获得CD2v重组蛋白,其大小约为47 ku,重组蛋白主要以包涵体形式存在,部分也可以融合表达蛋白形式存在。Western blotting结果显示,其可溶性上清经镍柱纯化后能被ASFV阳性血清识别,具有良好的反应原性。间接ELISA检测该多克隆抗体效价可达1∶512 000,间接免疫荧光试验和Western blotting表明该多克隆抗体可特异性识别真核表达的CD2v蛋白。以上结果表明,通过原核表达的ASFV CD2v重组蛋白具有较好的免疫原性,利用重组蛋白制备的多克隆抗体具有较高的抗体效价和特异性,为进一步研究ASFV EP402R生物学功能及基因缺失毒株的鉴别诊断和疫苗开发提供技术储备。

分类号： S852.651

  • 相关文献

[1]非洲猪瘟病毒EP153R蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备. 王召阳,林伟东,刘雪婷,蒋亚君,鑫婷,侯绍华,郭晓宇,朱鸿飞,贾红. 2020

[2]非洲猪瘟病毒360-12L蛋白的原核表达及其多克隆抗体制备. 蒋亚君,陈世钰,鑫婷,郭晓宇,王召阳,刘雪婷,崔帅,王洋,朱鸿飞,贾红. 2022

[3]非洲猪瘟病毒H108R蛋白的制备及其免疫原性评价. 张越,茹毅,郝荣增,杨锐,赵陇和,李亚军,杨洋,张荣,蒋成辉,郑海学. 2025

[4]Carboxin抗性基因(Cbx~R)原核表达及多克隆抗体的制备. 李小宇,张正坤,王秋华,张春雨,张淋淋. 2015

[5]猪CD40L基因的原核表达及特异性多克隆抗体制备. 薛刚,祝长青,郑其升,张雪花,李倬,侯继波. 2011

[6]延边白鹅IFN-α基因的原核表达及其表达产物生物学活性的研究. 彭永刚,陈海迪,高旭,张颖,鲁承. 2014

[7]绵羊肌肉抑制素C-端的表达、纯化及多克隆抗体的制备. 马毅,舒建洪,李晴,关宏,安晓荣,陈永福. 2009

[8]新型鸭呼肠孤病毒σC蛋白的原核表达及其多克隆抗体制备. 毕庄莉,朱英奇,陈宗艳,李传峰,孟春春,王桂军,刘光清. 2014

[9]Asial型口蹄疫病毒分离株P1基因的原核表达及其多克隆抗体的制备. 张中旺,张永光,王永录,潘丽,张昱. 2009

[10]小麦热激蛋白WHSP90基因的原核表达及多克隆抗体制备. 李琳,徐兆师,刘丽,于卓,李连城,陈明,马有志. 2009

[11]鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白FliC的原核表达、纯化及其多克隆抗体的制备. 陈明,徐幸莲,周光宏,汤晓艳,袁飞,陈爱亮. 2013

[12]桑树几丁质酶基因Machi1的克隆及原核表达. 肖圣燕,朱峰,冉瑞法,李镇刚,张永红,邵榆岚,唐芬芬,白兴荣. 2019

[13]西藏株小反刍兽疫病毒H蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备. 于瑞嵩,高位相,李凤平,董世娟,李震. 2018

[14]利用hAPOA1原核蛋白生产兔多克隆抗体. 徐志伟,赵杰,刘伟忠,刘照亭,王期. 2016

[15]猪NLRP3蛋白的原核表达与多克隆抗体制备. 张艳,王文秀,刘海隆,曹宗喜,谭树义. 2019

[16]一个植物半胱氨酸蛋白酶多克隆抗体的制备及其应用. 彭琪琪,羊健,廖乾生,张恒木. 2018

[17]灰飞虱内生病毒HiPV外壳蛋白VP1多克隆抗体的制备及在病毒检测中的应用. 朴君,许春玲,朴敬爱,周益军,李硕. 2019

[18]猪源Viperin基因的克隆、原核表达以及抗体的制备. 方剑玉,朱文豪,李海利,郭小参,白献晓,王克领. 2018

[19]琥珀蚕丝腺转录因子基因AaSGF-1的克隆、原核表达及组织表达分析. 李琼艳,陈安利,荀利杰,刘增虎,廖鹏飞,杨伟克,董占鹏. 2021

[20]口蹄疫病毒3B蛋白的表达纯化及其多克隆抗体的制备. 辛旭,吴香菊,齐静,王永志,李相安,杜正国,单虎,杜以军. 2021

作者其他论文 更多>>

微信小程序