大口黑鲈蛙虹彩病毒细胞增殖条件的优化

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘聪

作者： 刘聪;付小哲;林强;牛银杰;罗霞;梁红茹;马宝福;李宁求

作者机构：

关键词： 大口黑鲈;蛙虹彩病毒;同步接种病毒;异步接种病毒

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2024 年 46 卷 010 期

页码： 1026-1033

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为优化大口黑鲈蛙虹彩病毒（LMBV）在细胞中的最佳增殖条件，本研究通过测定鳜脑组织细胞系（CPB）和鲤鱼上皮瘤（EPC）细胞系的生长曲线后，分别以不同MOI（1、0.1、0.01）LMBV感染不同初始细胞数量的CPB细胞（2.5×10～5个/mL、4×10～5个/mL、5×10～5个/mL，根据细胞生长曲线确定为对数生长期及接近该期的细胞数量，后同）和EPC细胞（1×10～6个/mL、2×10～6个/mL、3×10～6个/mL）,28℃培养至细胞完全病变，采用荧光定量PCR（qPCR）和Muench-Reed法分别测定病毒拷贝数和病毒滴度(TCID50)。结果显示，以MOI 0.1的LMBV感染4×10～5个/mL CPB细胞时病毒产量最高，此时病毒拷贝数为107.4拷贝/μL，病毒滴度为108.75TCID50/mL；以MOI 0.1的LMBV感染1×10～6个/mL EPC细胞时病毒产量最高，此时病毒拷贝数为105.8拷贝/μL，病毒滴度为105.54TCID50/mL。表明CPB细胞更适合LMBV的增殖。为进一步筛选LMBV在CPB细胞中的最佳增殖条件，分别采用异步法接种病毒（初始CPB细胞数量分别为2.5×10～5个/mL、4×10～5个/mL及5×10～5个/mL,LMBV的MOI分别为1、0.1及0.01）和同步接种病毒（初始CPB细胞数量分别为2.5×10～5个/mL、4×10～5个/mL及5×10～5个/mL,FBS含量分别为4%、6%、8%及10%,LMBV的MOI分别为1、0.1及0.01）,28℃培养至各组细胞完全病变后，分别采用上述qPCR和Muench-Reed法测定各组细胞中的病毒拷贝数和病毒滴度，比较两种接种方式LMBV的最佳增殖条件。结果显示，采用异步接种病毒时，当初始CPB细胞的数量为4×10～5个/mL、MOI为0.1时LMBV拷贝数和病毒滴度均最高，分别为107.18拷贝/μL和108.22TCID50/mL；采用同步接种病毒时，当初始CPB细胞的数量为4×10～5个/mL、FBS含量为8%、MOI为0.1时获得的LMBV拷贝数和滴度均最高，分别为107.54拷贝/μL和108.67TCID50/mL。上述结果表明，当初始CPB细胞数量为4×10～5个/mL、FBS含量为8%、LMBV的MOI为0.1，并且采用同步接种病毒的方式是LMBV在CPB细胞中的最佳增殖条件。综上，本研究首次筛选到LMBV的易感细胞系，确定了LMBV在CPB细胞中的最佳增殖条件，为LMBV的大量生产及疫苗的研发提供了数据参考及技术指导。

分类号： S943

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