猪流感病毒核蛋白基因的原核表达及其在诊断中的初步应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 倪建强

作者： 倪建强;张春玲;李海燕;崔尚金;仇华吉;王云峰;田志军;童光志

作者机构：

关键词： SIV;核蛋白;琼脂扩散试验

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2004 年 26 卷 01 期

页码：

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 根据GenBank中A/Swine/HongKong/126/82(H3N2)株猪流感病毒(SIV)NP基因核苷酸序列设计合成一对引物,经RT＿PCR扩增了我国SIV分离株A/Swine/Heilongjiang/3/2000(H3N2)的核蛋白(NP)基因。将扩增所得NP基因克隆于pMD18＿T载体,酶切鉴定后对其序列分析表明NP基因与香港分离株同源性高达93.8%,然后定向亚克隆NP基因于原核表达载体pET30(a)的多克隆位点中,经酶切鉴定后,将含有NP基因的重组质粒命名为pET＿NP。用pET＿NP转化受体菌BL21,用诱导剂IPTG以不同浓度进行诱导,并在不同诱导时间收集样品。经SDS＿PAGE电泳分析证实NP基因获得了表达,并在终浓度为1mM的IPTG诱导下,6h其表达量达到高峰,经Westernblot分析证实表达的重组核蛋白具有反应活性,大小约为60kD。用表达产物作琼脂扩散试验,结果表明表达产物与SIV抗血清可形成清晰的反应沉淀线,而与其它9种猪病原阳性血清不发生反应。正常菌体蛋白与SIV阳性血清也不发生反应。通过对40份送检血清样品的检测结果显示其与HI试验的相符率高达95%以上。试验证明利用原核表达系统制备的重组核蛋白作为诊断用抗原,不仅制备过程简单而且所建立的琼扩诊断方法特异、快速、简便,其灵敏度也能满足现地的使用要求。目前正在进行现地的中试试验。

分类号： S852.65

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