利用ZFN敲除转基因猪细胞中多拷贝EGFP基因

文献类型： 中文期刊

第一作者： 任广彩

作者： 任广彩;张英;丛佩清;陈瑶生;何祖勇

作者机构：

关键词： 锌指核酸酶;外源基因;增强型绿色荧光蛋白;转基因猪;敲除效率

期刊名称： 中国生物化学与分子生物学报

ISSN： 1007-7626

年卷期： 2014 年 30 卷 08 期

页码： 837-842

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 锌指核酸酶(zinc finger nuclease,ZFN)是由特异性识别DNA的锌指结构域和Fok I切割结构域组成,能够在基因组特定位点上切割DNA,引起DNA双链断裂(double-strand break,DSB).通过DSB修复机制,可以使基因修饰的效率比传统方法提高102~104倍.目前,利用ZFN对动物内源基因进行敲除的研究较多,但对转基因动物中外源多拷贝基因进行敲除的报道较少.本研究首先利用荧光定量PCR法对本实验室培育的两头转基因猪中增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因的拷贝数进行鉴定,发现其拷贝数分别为11.95和17.36拷贝;然后将靶向EGFP的一对ZFN转染进拷贝数为17.36的EGFP转基因猪的成纤维细胞中,并通过流式和CEL-1酶切方法检测敲除效率.结果表明,转染400 ng、800 ng和1 200 ng ZFN的切割效率分别为0.97%、1.39%和1.76%,可见随着转染ZFN剂量的增加,ZFN的切割效率逐渐提高.但是,不发绿色荧光的细胞比例却没有明显提高,因此认为,ZFN敲除转基因动物中多拷贝基因的效率还是比较低.

分类号： S828

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