马γ-干扰素成熟蛋白基因在大肠埃希氏菌中表达及其多克隆抗体制备

文献类型： 中文期刊

第一作者： 白宇

作者： 白宇;童铁钢;刘光亮;肖一红;王群;徐树兰;张维军;吴东来

作者机构：

关键词： 马γ-干扰素;表达;纯化;多克隆抗体

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2007 年 11 期

页码： 878-882

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 采用RT-PCR从ConA刺激的马外周血单核细胞(PBMC)中扩增获得含信号肽的马γ-干扰素(Equine interferon-γ,EIFN-γ)基因,将其克隆至载体pCR2.1-TOPO中。通过PCR方法从重组质粒(pCR-EIFN-γ)中扩增马干扰素成熟蛋白(Mature EIFN-γ,reEIFN-γ)基因,并将其亚克隆至原核表达载体pET-28a(+)。重组子经测序鉴定正确后转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,对其产物进行SDS-PAGE分析和Western blot鉴定,将纯化后的表达产物免疫新西兰白兔制备多克隆抗体。结果表明,mEIFN-γ基因全长为441bD,含一个开放阅读框,编码146个氨基酸的成熟蛋白;对其表达产物以可溶性和包涵体两种形式存在,重组蛋白相对分子量约为18Ku,且具有免疫反应活性。mEIFN-γ基因在大肠杆菌中高效表达并在非变性和变性条件下,采用Ni~+亲和层析纯化方法均可获得高纯度的重组马γ-干扰素制备的多克隆抗体,为建立马γ-干扰素检测方法、监测机体免疫状态和研究机体免疫机制奠定了基础。

分类号： S852.4

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