应用竞争PCR定量检测猪IFN-γ mRNA

文献类型： 中文期刊

第一作者： 郭海龙

作者： 郭海龙;童光志;仇华吉;周艳君;兰文生;王云峰;吴东来

作者机构：

关键词： 猪IFN-γ;竞争PCR;内对照;嵌入光密度

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2003 年 23 卷 03 期

页码： 278-280

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 运用 RT- PCR从经 Con A体外刺激培养的猪外周血单核细胞 (PBMC)提取的细胞总 RNA中扩增猪 γ-干扰素(IFN-γ)的部分片段 ,经酶切鉴定后双酶切缺失中间一小片段 ,将余下的 2个较大片段连接 ,并用相同的引物在相同条件下扩增连接产物 ,从而获得截短的同源性片段。将其纯化后克隆于 p MD1 8- T载体 ,重组质粒经酶切和 PCR鉴定后进行序列测定 ,验证无误后作为竞争性模板内对照 ,一定比例稀释后分别与等体积经刺激培养的 PBMC总 RNA反转录产物进行 PCR,产物电泳后经扫描分析获得各目标条带与竞争条带的溴化乙锭 (EB)嵌入光密度值 (IOD) ,经校正后取上述两者比值的对数值作为 Y轴 ,取已知竞争模板相应浓度的对数值作为 X轴 ,绘制成竞争曲线。应用建立的竞争 PCR对不同样品重复试验表明 ,本方法操作简单 ,结果可靠 ,稳定性高 ,适用于猪 IFN-γ m RNA的定量检测

分类号： S852.4

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[1]应用竞争PCR定量检测猪IFN-γmRNA. 郭海龙,童光志,仇华吉,周艳君,兰文生,王云峰,吴东来. 2003

[2]应用竞争PCR方法检测亚硝化细菌的研究. 张艳,李秋芬,王晓熙. 2009

[3]猪干扰素-γ基因的表达、纯化及活性分析. 潘晓梅,窦永喜,骆学农,刘琼,张冬峰,岳城,才学鹏. 2009

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