柑橘褪绿矮缩病毒dot-ELISA检测方法的建立及应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 秦阳阳

作者： 秦阳阳;陈香玲;王甲军;叶肖;申世凯;周彦

作者机构：

关键词： 柑橘褪绿矮缩病毒;外壳蛋白;抗血清;斑点酶联免疫吸附法

期刊名称： 果树学报

ISSN： 1009-9980

年卷期： 2022 年 39 卷 011 期

页码： 2181-2187

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： [目的]柑橘褪绿矮缩病毒(Citrus chlorotic dwarf-associated virus,CCDaV)是一种新的柑橘病毒,为给我国柑橘脱毒苗木质量控制和田间监测提供技术支撑,建立了一种灵敏度高、特异性强的快速检测方法.[方法]通过序列分析和相似性比对,明确抗原靶标;构建CCDaV-CP的原核表达载体,诱导目的蛋白表达后作为抗原用于注射兔子,制备抗血清.运用Western blot检测效价.通过优化抗体浓度,建立CCDaV的dot-ELISA检测方法,明确其灵敏度,并用于田间疑似样品检测.[结果]以外壳蛋白(CP)的保守区域为靶标,成功构建了表达载体pET28a-CCDaV-CP,其在18℃,IPTG浓度0.5 mmol·L-1时,诱导12 h,目的蛋白的表达量高.制备的特异性抗血清效价为1:3000.由此建立的dot-ELISA检测方法在提取液被稀释640倍时,仍能检测出CCDaV.应用该方法对42份田间疑似样品的检测结果与PCR法的符合率为94.73%.[结论]首次获得了CCDaV的抗血清,并以此建立了快捷、灵敏、准确的dot-ELISA检测方法,为CCDaV的快速检测和防控提供了技术支撑.

分类号： S666

  • 相关文献

[1]苹果茎痘病毒外壳蛋白的原核表达及抗血清制备. 李丽丽,张志宏,董雅凤,张尊平,范旭东,裴光前. 2010

[2]高粱花叶病毒外壳蛋白的原核表达及其抗血清制备. 龚殿,孙玉娟,张雨良,王健华,刘志昕. 2013

[3]葡萄病毒B外壳蛋白原核表达及抗血清制备. 任芳,董雅凤,张尊平,范旭东,胡国君,李正男,周俊. 2016

[4]柑橘衰退病毒柠檬分离物外壳蛋白基因原核表达及多抗血清制备. 尹跃艳,董家红,岳建强,栗艳琼,陈伟,张仲凯. 2008

[5]辣椒脉斑驳病毒CP基因的原核表达及其抗血清的制备. 吴育鹏,王健华,冯团诚,张雨良,王小明,刘志昕. 2010

[6]利用ID-ELISA技术调查分析海南3种主要番木瓜病毒分布及感病情况. 杨勇,庹德财,沈文涛,言普,黎小瑛. 2015

[7]柑橘褪绿矮缩病毒侵染尤力克柠檬诱导细胞自噬. 余玲,申世凯,王甲军,柏自琴,陈力,胡德玉,周彦. 2025

[8]马铃薯X病毒外壳蛋白基因的克隆与系统进化分析. 黄永会,朱英,刘永翔. 2014

[9]贵州烟草花叶病毒株系初探. 王莉爽,吴石平,杨学辉,何海永,陈小均,袁洁. 2012

[10]抗马铃薯Y病毒的ihpRNA高效茎长度的选择. 刘新建,陶刚,刘永翔,朱英,邱礽,李奇科,刘作易. 2011

[11]不同寄主植物上芜菁花叶病毒外壳蛋白基因克隆及分析. 张成玲,赵永强,杨冬静,孙厚俊,徐振,谢逸萍. 2014

[12]马铃薯X病毒黑龙江分离物外壳蛋白基因克隆与序列分析. 张威,白艳菊,申宇,高艳玲,范国权,耿宏伟,王魏,孟宪欣. 2010

[13]天津地区番茄褪绿病毒的分子检测与基因组部分序列分析. 金凤媚,薛俊,宋建,于海涛,段红英. 2016

[14]云南马铃薯A病毒分布及其外壳蛋白分子变异分析. 王东,张磊,董家红,张仲凯. 2012

[15]侵染贵州火龙果的仙人指X病毒的基因组序列变异. 郑乾明,王小柯,马玉华. 2020

[16]黄瓜绿斑驳花叶病毒CP基因克隆及亚细胞定位. 范小燕,杨柳,季英华,任春梅,缪倩,韩玉春,章松柏,程兆榜,鲁红学. 2018

[17]山西苹果褪绿叶斑病毒的分布及遗传多样性分析. 续海红,王燕飞,窦彦鑫,陈伟,杨凯. 2021

[18]MDMV CP基因的克隆及其转基因玉米的研究. 刘小红,张红伟,刘昕,刘欣洁,谭振波,荣廷昭. 2005

[19]云南胡椒花叶病病原检测及亚组鉴定. 刘向阳,刘爱勤,周琳. 2014

[20]我国小麦黄矮病病原研究进展. 成卓敏,王锡锋. 2003

作者其他论文 更多>>

微信小程序