PCV2/PCV3二价重组杆状病毒疫苗的构建与鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 徐鹏

作者： 徐鹏;姜宇航;许汪;宋利娜;李乐天;陈竞;郝鹏飞;金宁一;任林柱;李昌

作者机构：

关键词： 猪圆环病毒;重组杆状病毒;Cap蛋白;病毒样颗粒

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2021 年 010 期

页码： 1915-1921

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本试验旨在构建并获得共表达PCV2/PCV3 Cap蛋白的病毒样颗粒（virus-like particles, VLPs）。扩增PCV2 Cap及PCV3 Cap基因,将其克隆至pEASY-Blunt载体,分别命名为pEPC2、pEPC3,验证正确后将目的基因分别连接至杆状病毒双启动子表达载体pFastBaC-Dual,获得含有PCV2、PCV3 Cap基因的重组杆状病毒质粒pFBD-PC2-PC3。将该重组质粒转化至大肠杆菌DH10-BacTM感受态细胞,进行蓝白斑筛选与PCR鉴定,获得重组杆粒Bacmid-PC2-PC3。利用脂质体将Bacmid-PC2-PC3转染至SF9细胞进行病毒拯救,转染后72 h收取上清病毒液,并盲传3代。用其感染Sf9细胞,通过间接免疫荧光及Western blot验证目的蛋白是否表达;同时收集感染后的Sf9细胞上清,在电镜下观察是否形成VLPs。结果显示,成功构建了共表达PCV2/PCV3 Cap蛋白的重组质粒,并获得重组杆粒,拯救出重组杆状病毒。病毒感染Sf9细胞后,目的蛋白获得表达且具有反应原性,能够形成VLPs。本研究成功制备了共表达PCV2/PCV3 Cap蛋白的VLPs,为深入开展猪圆环病毒二价新型疫苗研发奠定了坚实基础。

分类号： S852.651

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