番鸭呼肠孤病毒YB株σB蛋白的基因序列分析及其原核表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 吴晓平

作者： 吴晓平;张红星;吴异健;韩典霖;王劭

作者机构：

关键词： 番鸭呼肠孤病毒;σB蛋白;序列分析;原核表达

期刊名称： 病毒学报

ISSN： 1000-8721

年卷期： 2013 年 29 卷 02 期

页码： 185-191

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 番鸭呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus,DRV)是造成雏番鸭高死亡率的重要病原体,深入其检测与免疫研究对于防控DRV感染意义重大。利用RT-PCR和测序技术,对3株福建DRV分离株的S3基因进行序列分析,发现DRV-YH、YJL株与禽呼肠孤病毒(Avian reovirus,ARV)遗传距离较近,同源性高达94.6%～98.9%,而DRV-YB株与ARV同源性仅为60.6%～61.7%。构建和鉴定DRV YB株重组原核表达质粒pET-30a-S3,并转化大肠杆菌BL21,SDS-PAGE表明,表达的目的蛋白分子量约为42ku,IPTG最适诱导浓度为0.1mM,最适诱导时间为5h,最适诱导温度为37℃,以包涵体形式存在。薄层扫描显示重组DRVσB蛋白占菌体总量的67.7%。以Ni 2+柱亲和层析纯化蛋白,纯化后的目的蛋白纯度为93%,质量浓度为0.86g/L。Western blot分析该融合蛋白能与抗DRV阳性血清发生特异性反应,表明重组DRVσB蛋白具有良好的免疫反应性。

分类号： S852.65

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