猪伪狂犬病毒gB蛋白间接化学发光抗体检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 向国庆

作者： 向国庆;宋帅;温肖会;吕殿红;陈玉婷;连聪;贾春玲;顾有方;罗胜军

作者机构： 广东省农业科学院动物卫生研究所/广东省畜禽疫病防治研究重点实验室/农业农村部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站;安徽科技学院动物科学学院/动物营养调控与健康安徽省重点实验室

关键词： 猪伪狂犬病毒;重组gB蛋白;化学发光;抗体;免疫分析;标准曲线;ROC曲线

期刊名称： 中国农学通报

ISSN： 1000-6850

年卷期： 2024 年 40 卷 036 期

页码： 156-164

收录情况： CSCD

摘要： 研究旨在建立一种快速检测猪伪狂犬病毒（Pseudorabies virus,PRV）gB蛋白间接CLIA抗体检测方法，以期为猪伪狂犬病（Pseudorabies,PR）的防控和规模化猪群疫苗免疫水平评估提供技术支持。本研究将羧基磁珠与重组gB蛋白进行偶联反应形成免疫磁珠，利用全自动化学发光仪对各项反应条件进行优化；选用6种不同浓度的标准品绘制标准曲线；通过绘制ROC曲线确定阴阳性判定标准；初步完成方法建立后分别对其特异性、敏感度、重复性、符合率进行评估。结果显示磁珠偶联最佳pH 6.0，蛋白偶联最佳浓度为40μg/mL,10%BSA为最优封闭剂，酶标抗体最佳稀释度为1:20000，血清反应时间为5 min，酶标抗体反应时间为10 min，预激发液反应时间为5 min，最终绘制出一条R2=0.9987的标准曲线，同时将判定标准定为：≥16.78 U为阳性，<16.78 U则为阴性。方法学评估中与7种猪类病原的阳性血清均无交叉反应，敏感度略高于商业化试剂盒，批内批间系数均小于10%，与商业化ELISA试剂盒比对总符合率为98.9%。本研究建立的猪伪狂犬病毒g B蛋白间接化学发光抗体检测方法可用于PR流行病学调查及疫苗免疫水平评估，为后续试剂盒研发提供理论参考。

分类号： S852.651

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