坦布苏病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王楠楠

作者： 王楠楠;刘芳;许漩;张世伟;聂睿;殷冬冬;刘光清;王桂军

作者机构：

关键词： 鸭;坦布苏病毒;SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR;E基因;绝对定量

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2015 年 01 期

页码： 15-19

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为建立检测坦布苏病毒的SYBR GreenⅠ绝对荧光定量RT-PCR,针对坦布苏病毒E基因设计1对特异性引物,用PCR扩增E基因后将其连接到pMD19-T载体上构建重组质粒。重组质粒经PCR及测序鉴定后,作为阳性模板绘制了SYBR GreenⅠ荧光定量PCR标准曲线,并进行特异性、敏感性和重复性试验。结果显示,经反应条件优化后,绘制的SYBR GreenⅠ绝对荧光定量RT-PCR的标准曲线的线性关系显著(r2>0.999),平均试验间变异系数为0.26%;检测敏感性可达到2×101 copies/μL。应用该方法对人工感染坦布苏病毒的鸭组织进行的检测结果显示,从36份病料组织中检出35份为阳性,检出率为97%。结果表明,成功建立了检测坦布苏病毒的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR,该方法较常规PCR更快捷、敏感、准确,适用于坦布苏病毒临床样品的检测。

分类号： S852.65

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