猪伪狂犬病病毒IgA抗体间接ELISA检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 黄雨晴

作者： 黄雨晴;华涛;唐波;常晨;刘国阳;张雪花;卢宇;侯继波;张道华;许家荣

作者机构：

关键词： 伪狂犬病病毒;gB基因;原核表达;IgA;间接ELISA

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2019 年 011 期

页码： 1346-1353

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了建立检测猪伪狂犬病病毒(PRV)黏膜免疫时特异的IgA抗体的间接ELISA方法,本研究采用PCR方法扩增了PRV gB基因截短片段,并将其连入原核表达质粒pGEX-6P-1,构建的表达质粒转化至大肠杆菌Transetta(DE3)菌株后,采用IPTG进行诱导表达,得到gB重组蛋白的可溶性表达,并用谷胱甘肽亲和层析柱进行蛋白纯化.以纯化的gB重组蛋白作为包被抗原,以山羊抗猪IgA-HRP为二抗,建立了猪伪狂犬病病毒IgA的间接ELISA检测方法.经ELISA反应条件优化,确定抗原包被浓度为2.4μg/mL,封闭液为10 g/L明胶,一抗37℃孵育1.5 h,二抗1∶20 000稀释后37℃孵育0.5 h,TMB显色液显色10 min.该方法的批内和批间变异系数均小于10%,重复性较好.利用该间接ELISA方法对PRV黏膜免疫的仔猪进行检测,结果可以在鼻腔黏液中检测出特异的IgA抗体.本试验为PRV黏膜免疫提供了初步检测方法.

分类号： S852.65

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