抗鹅星状病毒Cap蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 孙佳卉

作者： 孙佳卉;刘志艺;黄聪;李传峰;刘光清;陈宗艳

作者机构：

关键词： 鹅星状病毒;Cap蛋白;原核表达;单克隆抗体

期刊名称： 中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2021 年 001 期

页码： 58-63

摘要： 自2016年以来,鹅星状病毒（GoAstV）已成为当前危害鹅养殖业生产的重要病原体之一,雏鹅均易感,主要引起9～19日龄雏鹅死亡,以雏鹅腿关节肿胀及肾脏尿酸盐沉积导致肾炎为主要病征。建立相应的病原学与血清学检测方法对于防控该病至关重要。为建立基于病毒Cap蛋白的诊断技术,本研究构建了鹅星状病毒去核定位信号肽的Cap基因原核表达质粒pET-30a-Cap,转化BL21（DE3）后用IPTG诱导表达,并通过SDS-PAGE和Western blot检测Cap蛋白的表达。大量表达并纯化重组蛋白后,将其免疫BALB/c小鼠,采用间接ELISA检测免疫小鼠抗体效价,制备单克隆抗体,并对其进行鉴定。结果显示:获得的重组蛋白分子量约为28 kDa;通过3次亚克隆筛选最终获得5株杂交瘤细胞株1A5G10、1C11B11、5B7G8、9A12B12、9C3E11,抗体效价均可达1:51～200以上;1A5G10、5B7G8、9C3E11重链为IgG1型,1C11B11、9A12B12重链为IgG2b型,轻链均为κ型;制备的单克隆抗体均可与重组蛋白反应或GoAstV发生反应;其中5B7G8株与GoAstV发生反应,1C11B11、9A12B12株与GoAstV发生反应。本研究结果为GoAstV诊断方法的建立以及GoAstV Cap蛋白功能的进一步研究奠定了坚实基础。

分类号： S852.65

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