瓜实蝇DNA甲基化的MSAP体系建立与优化
文献类型: 中文期刊
第一作者: 龚治
作者: 龚治;周世豪;马华博;张亚楠;符悦冠
作者机构:
关键词: 瓜实蝇;DNA甲基化;甲基化敏感扩增多态性;表观遗传
期刊名称: 热带农业科学
ISSN: 1009-2196
年卷期: 2016 年 36 卷 05 期
页码: 37-43
摘要: 瓜实蝇[Bactrocera cucurbitae(Coquillett)]是中国重要的蔬菜害虫,但其DNA甲基化研究尚未见报道。甲基化敏感扩增多态性是研究DNA甲基化的重要技术之一。通过对酶切反应、连接、PCR扩增和引物筛选等条件优化,建立瓜实蝇MSAP反应体系,即:120μL酶切体系中加入10 U的限制性内切酶与600 ng基因组DNA,于37℃酶切反应过夜;220μL连接体系中加入T4连接酶1 U,HpaⅡ-MspⅠ-adapter接头50 pmol,Eco R I-adapter接头5 pmol,并于16℃反应12 h;3连接产物稀释后进行PCR预扩增和选择性扩增,再经6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染检测结果。通过该体系筛选出适用于瓜实蝇基因组DNA甲基化多态性研究的6对引物;瓜实蝇MSAP体系为瓜实蝇的表观遗传学研究提供了技术支持。
分类号: S433
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