荔枝SRAP-PCR反应体系的优化

文献类型： 中文期刊

第一作者： 昝逢刚

作者： 昝逢刚;吴转娣;曾淇;张惠云;李明芳;郑学勤

作者机构：

关键词： 荔枝;SRAP-PCR反应体系;优化

期刊名称： 基因组学与应用生物学

ISSN： 1008-3464

年卷期： 2009 年 28 卷 01 期

页码： 137-141

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： SRAP(sequence-related amplified polymorphism)是基于基因的内含子和外显子区域进行检测的新型分子标记技术,具有多态性高、重复性好、易测序、便于克隆目标片段等特点,在荔枝(Litchi chinensis Sonn)中还没有相关的研究报道。为了建立适合荔枝的SRAP反应体系,对反应体系中的DNA模板、Mg2+、dNTP、引物、Taq DNA聚合酶诸因子的用量进行了探索,确立了适合荔枝的SRAP反应体系为:在20μL反应体系中,模板DNA为40ng,Mg2+浓度2.5mmol/L,dNTP0.3mmol/L,引物5mmol/L,Taq DNA聚合酶1.0U。扩增程序为:94℃预变性3min,反应前5个循环在94℃ 1 min、35℃ 1 min、72℃ 1 min的条件下运行;随后的35个循环退火温度提高到50℃;最后72℃延伸10min。利用该反应体系对荔枝10个不同品系进行SRAP反应,用5%的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,结果显示:不同品系间DNA谱带多态性丰富。证实该体系稳定可靠,可以用于荔枝的分子标记研究。

分类号： S667.1

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