基因Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒RAA-CRISPR/Cas12a检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 肖思民

作者： 肖思民;侯泽玮;刘方幸妍;赵祎晨;尹纪元;徐伟;吕利群;王浩

作者机构：

关键词： GCRV-Ⅱ;RAA;CRISPR/Cas12a;现场诊断

期刊名称： 水生生物学报

ISSN： 1000-3207

年卷期： 2024 年 48 卷 011 期

页码： 1905-1914

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为建立一种特异性强、灵敏度高、操作便捷的Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒(GCRV-Ⅱ)检测方法,研究利用重组酶介导链置换核酸扩增技术(Recombinase-aid amplification,RAA)与成簇的规律间隔短回文重复序列(CRISPR)系统相结合,构建了GCRV-Ⅱ病毒RAA结合CRISPR/Cas12a可视化"一步"快速检测方法.首先选择GCRV-Ⅱ毒株间序列保守,不同基因型GCRV间差异明显的s6基因(GQ896337)的保守区设计5对RAA候选引物和2对crRNA,合成并筛选出特异性引物和crRNA组合.其次测试反应的特异性、灵敏度和准确性.最后建立下层扩增相、上层检测相的"一步法"反应体系.该检测方法在37℃恒温下反应可检测出GCRV-Ⅱ,最低检测限为102 copies/μL.对24份临床样本进行检测,该检测方法阳性检出率高于现行国标PCR法.研究建立的GCRV-Ⅱ检测方法操作便捷、特异性高、灵敏度好、可重复性强、与设备兼容性好、在蓝光灯下可通过肉眼判断检测结果.

分类号： S941

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