犬细小病毒VP2抗体竞争ELISA检测方法的初步建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 赵丹

作者： 赵丹;贾红;侯绍华;袁维峰;郭晓宇;柏丽华;仆仕金;朱鸿飞

作者机构：

关键词： 犬细小病毒;VP2基因;表达;抗体;竞争ELISA

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2012 年 39 卷 04 期

页码： 11-16

收录情况： 北大核心

摘要： 本研究旨在制备犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)VP2抗体,并建立竞争ELISA检测方法,从而为CPV疫苗免疫效果的检测及血清学调查提供技术支持。参照GenBank中犬细小病毒VP2基因序列设计1对添加EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点的引物,PCR扩增VP2基因全长序列,将其克隆到pET28a(+)载体中,构建原核表达载体pET28a-VP2,转化大肠杆菌Rosetta,表达并纯化了重组蛋白。SDS-PAGE及Western blotting分析表明,目的蛋白分子质量大小为67ku,可被CPV抗血清识别,证明其能与特异性抗体结合,有良好的抗原性。以纯化的重组蛋白免疫家兔制备VP2多抗,采用辣根过氧化物酶进行标记,初步建立了竞争ELISA方法。结果显示,VP2重组蛋白的最佳包被浓度为5μg/mL,酶标多抗的最佳稀释度为1∶3200,封闭条件为4℃过夜,最适的封闭液为10%小牛血清,山羊抗兔IgG-HRP的最佳工作浓度为1∶5000,显色时间为25min。竞争ELISA试验结果表明,该方法具有较强的稳定性,有望为CPV疫苗免疫效果的判定及血清学调查提供技术手段。

分类号： S858.292

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