火鸡疱疹病毒细菌人工染色体的构建

文献类型： 中文期刊

第一作者： 兰德松

作者： 兰德松;石星明;王云峰;崔红玉;刘长军;王玫;胡文玮;童光志

作者机构：

关键词： 火鸡疱疹病毒;病毒拯救;细菌人工染色体;BAC分子克隆化病毒

期刊名称： 微生物学报

ISSN： 0001-6209

年卷期： 2008 年 48 卷 6 期

页码： 811-817

收录情况： CSCD

摘要： 火鸡疱疹病毒（HVT）为一种α疱疹病毒，因其与马立克氏病病毒（MDV）抗原相关性而被广泛用作预防马立克氏病（MD）的活疫苗。【目的】本研究的目的是构建HVT全基因组感染性细菌人工染色体（BAC）。【方法】利用Eco-gpt（黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶）基因和BAC载体pBeloBAC11的基本功能序列，构建重组病毒转移载体pGAB-gpt-BAC11。通过将pGAB-gpt-BAC11与HVT感染细胞总DNA共转染原代鸡胚成纤维细胞（CEF），待出现病毒噬斑后，利用霉酚酸（MPA）阻断核酸代谢途径，经过筛选获得纯化的重组病毒purified-rHVT。提取purified-rHVT感染细胞总DNA电转化大肠杆菌DH10B感受态细胞，在氯霉素抗性平板上筛选阳性克隆，并用酶切和PCR方法对其进行鉴定。随机选取BAC克隆提取BACDNA转染次代CEF，完成HVT重组病毒的拯救。【结果】经过6轮筛选后获得纯化的重组病毒，并筛选到25个BAC分子克隆化病毒。其中BAC6、BAC8和BAC10再次启动病毒感染，产生与野生型HVT感染CEF相似的病毒噬斑形态，说明已经获得拯救出的HvT重组病毒。【结论】本研究构建了HVT全基因组感染性细菌人工染色体，建立了HVT反向遗传操作技术平台。

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