抗鸡早幼粒细胞白血病蛋白单克隆抗体的制备及其在荧光检测中的应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 曹梦瑶

作者： 曹梦瑶;王晶;周林宜;程晶;李永清;许健;江波;胡格

作者机构：

关键词： 早幼粒细胞白血病蛋白(PML);单克隆抗体;核小体(NBs);马立克病病毒(MDV)

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2024 年 51 卷 010 期

页码： 4500-4509

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： [目的]探究鸡早幼粒细胞白血病蛋白核小体(PML NBs)在马立克病病毒(Marek's disease virus,MDV)感染过程中的生物学功能,制备抗鸡早幼粒细胞白血病蛋白(Ch-PML)单克隆抗体,建立可视化检测Ch-PML的方法.[方法]通过原核表达系统制备Ch-PML重组蛋白,并将其作为免疫原免疫BALB/c小鼠,采用细胞融合技术将骨髓瘤细胞和免疫小鼠的脾细胞进行融合,用ELISA方法筛选出分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株,通过体内诱生法制备腹水并用Protein A/G纯化抗Ch-PML单克隆抗体,利用Western blotting和ELISA方法检测单克隆抗体的特异性、亲和力和亚类,最后利用该单克隆抗体建立用于鸡PML NBs的间接免疫荧光试验(IFA)检测方法.[结果]Ch-PML蛋白在大肠杆菌中可溶性表达,分子质量大小为19 ku;以此蛋白成功制备了 1株抗Ch-PML单克隆抗体,该抗体具有良好的特异性和高亲和力,经亚类和型检测,其为IgG2b亚类,轻链为Kappa型.利用制备的抗Ch-PML单克隆抗体建立的IFA检测方法发现,内源性PML NBs在宿主细胞核中呈点状分布,过表达的Ch-PML在宿主细胞核中形成团块状聚集体,且MDV感染宿主细胞后核内PML NBs数量比未感染细胞显著减少(P<0.05),说明MDV感染导致核内的PML NBs组装受到抑制.[结论]本研究利用制备的抗Ch-PML单克隆抗体建立了鸡PML NBs的IFA检测方法,并发现MDV抑制宿主细胞PML NBs组装这一现象,为MDV致病机制的解析提供了新的研究思路和工具.

分类号： S852.4%S855.3

  • 相关文献

[1]利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建马立克病病毒超强毒株原癌基因meq缺失株及其鉴定. 滕蔓,郑鹿平,刘金玲,柴书军,张改平,罗俊. 2020

[2]莱克多巴胺单克隆抗体的研制及阻断ELISA检测方法的建立. 张海棠,王自良,邓瑞广,钟华,范国英. 2008

[3]贫血患者血清转铁蛋白受体测定的临床意义. 乔宏,吴春梅,管洪在,王文正. 2000

[4]满江红鱼腥藻单克隆抗体的制备和应用研究. 刘中柱,程由铨,唐龙飞,郑琦,宋铁英,陈明昂,李怡英,林天龙. 1989

[5]大豆花叶病毒东北3号株系NIb蛋白表达、纯化及单克隆抗体制备. 张淋淋,李小宇,张春雨,尤晴,张正坤. 2016

[6]生物工程中的仪器设备. 尤崇杓,蒋士强. 1989

[7]麦长管蚜ELISA检测体系的建立. 高书晶,庞保平,陈正贤. 2008

[8]高致病性猪生殖与呼吸综合征病毒间接免疫荧光鉴别方法的建立. 陈仕龙,黄梅清,林天龙,江斌,庄向生,陈少莺. 2009

[9]植物病原原核微生物快速检测新技术的应用现状. 徐平东,柯冲. 1991

[10]植酸酶单克隆抗体的制备及鉴定. 胡骁飞,魏凤仙,李青梅,职爱民,王方雨,孙亚宁,柴书军,付晓鹤. 2012

[11]伪狂犬病毒单克隆抗体的特性和应用. 程由铨,李怡英,吴平,林天龙,庄向生,黄宁. 1992

[12]抗莱克多巴胺单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及其免疫学特性鉴定. 张海棠,王自良,邓瑞广,钟华,范国英. 2009

[13]水稻细菌性条斑病菌单克隆抗体的制备及特性. 种藏文,程由铨,王长方,卢同,李怡英,吴平,朱哲大. 1990

[14]bar基因表达蛋白单克隆抗体制备及ELISA检测方法的建立. 龙丽坤,李葱葱,张明,李飞武. 2014

[15]东北地区大豆花叶病毒3号株系衣壳蛋白的表达、纯化及单克隆抗体制备. 王永志,苏颖,米丽娟,张伟,宋淑云,高旭东,刘颖,张正坤,董英山,李启云. 2011

[16]猪繁殖与呼吸综合征病毒核蛋白单克隆抗体的制备和初步鉴定. 米立娟,吕宗吉,张守峰,刘晔,王永志,扈荣良. 2012

[17]CP4-EPSPS夹心ELISA配对单克隆抗体的研制和生物学特性分析. 李忠鹏,于寒松,胡耀辉,时圣凤,刘蕴慧,段永杰,李小宇,王永志,李启云. 2013

[18]山羊痘病毒p32基因的克隆、表达及单克隆抗体制备. 王永志,苏颖,米丽娟,付云红,范志强,扈荣良,赵玉民. 2011

[19]狂犬病病毒糖蛋白单克隆抗体的制备. 米立娟,王永志,刘晔,张守峰,扈荣良. 2012

[20]大豆脂肪氧化酶同功酶联合鉴定技术的建立. 马志民,秦君,杨春燕,邸锐,闫龙,张梅申,李子千,李亚璞,史晓蕾,鲍聪,许宁,封树平,张孟臣. 2014

作者其他论文 更多>>

微信小程序