基因修饰对鸡新城疫病毒F_48E_9株HN基因DNA疫苗表达效力的影响

文献类型： 中文期刊

第一作者： 贺笋

作者： 贺笋;石星明;王云峰;王攻;冉多良;童光志

作者机构：

关键词： NDV,DNA疫苗;密码子优化;信号肽;间接免疫荧光;免疫印迹

期刊名称： 生物工程学报

ISSN： 1000-3061

年卷期： 2008 年 24 卷 2 期

页码： 226-231

收录情况： CSCD

摘要： DNA疫苗的免疫效果与抗原基因的表达量和免疫原性有直接关系，为了提高目的基因的表达量，本研究对NDV F_(48)E_9株的HN基因进行了修饰，对修饰前后HN基因表达水平进行了比较。利用分子生物学软件将NDVF48E9株的HN基因的密码子全部替换为鸡体内偏嗜性密码子，同时在HN基因的5’端加上同样已替换密码子的禽流感病毒HA蛋白信号肽序列以期望提高目的蛋白在细胞中的表达。修饰后HN基因命名为SoptiHN，剔除信号肽的HN基因命名为optiHN。将SoptiHN、optiHN和F_(48)E_9株的HN基因分别克隆到真核表达载体pVAX1和含有多个鸡体内最适免疫刺激序列CpG—ODN的载体pVAX1-CpG中，将他们分别命名为pV-SoptiHN、pVC—SoptiHN、pV-optiHN、pVC—optiHN和pV-HN、pVC-HN，用这些质粒转染293T细胞，48小时后间接免疫荧光和Western blotting检测细胞中瞬时表达的HN蛋白。结果显示，与未经修饰的HN基因相比，修饰后的HN基因体外瞬时表达水平明显提高，并且密码子优化与添加信号肽序列这两种途径都可以提高HN基因的体外表达量．

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