PRRSV河南株ORF7基因的克隆表达及条件优化

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘明

作者： 刘明;张改平;肖治军;郭军庆;乔松林;王丽;史西保;刘运超;游雷鸣;王爱萍

作者机构：

关键词： 猪繁殖与呼吸综合征;反转录;克隆;表达;Western-blot;美洲型

期刊名称： 河南农业科学

ISSN： 1004-3268

年卷期： 2011 年 40 卷 01 期

页码： 136-140

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 从猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)河南分离株(HN07-1、HN07-2)的细胞培养物中提取RNA,根据参考株IAF-exp91 N蛋白基因序列设计出2对引物,成功克隆出ORF7全长基因,并连接至pMD-19T载体。基因测序结果表明,2株PRRSV河南分离株ORF7基因序列完全相同;该序列与HB-4(hs)同源性为100%,与标准美洲株VR-2332和我国早期分离的BJ-4株同源性为93.8%。将该基因亚克隆到原核表达载体pGEX-6p-1后,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达并对表达条件进行优化。SDS-PAGE和Western-blot结果表明,成功表达了约40 kD的融合蛋白;使用1.0 mmol/L的IPTG在2×YT培养基中诱导8 h可获得最大表达量。

分类号： S852.65

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