柔嫩艾美耳球虫HSP 基因的克隆、表达及鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 颜彦

作者： 颜彦;韩红玉;黄兵;赵其平;董辉;姜连连;李玉剑;樊玉娟;姚倩

作者机构：

关键词： 柔嫩艾美球虫;热激蛋白;发育阶段;免疫原性

期刊名称： 生物工程学报

ISSN： 1000-3061

年卷期： 2009 年 25 卷 8 期

页码： 1121-1129

收录情况： CSCD

摘要： 为研究柔嫩艾美耳球虫热激蛋白(Heat shock proteins,HSPs)的生物学特性,应用RACE和RT-PCR技术,从柔嫩艾美耳球虫子孢子中首次克隆获得了EtHSP的全长cDNA(GenBank Accession No.FJ911605).EtHSP包含一个1455 bp的开放阅读框,编码484个氨基酸,预测表达蛋白的分子量大小为53.5 kD.应用Real-time PCR对柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段(未孢子化卵囊、孢子化卵囊、子孢子和裂殖子)表达量进行分析,发现该基因在子孢子阶段的表达明显高于其他阶段.同时,构建了原核表达重组质粒pET28a(+)-EtHSE转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达后,对表达产物进行SDS-PAGE及Western blotting分析.结果显示.重组质粒pET28a(+)-EtHSP在大肠杆菌中以包涵体形式表达,经1 mmol/LIPTG诱导6h后的表达量最高,该蛋白可被抗柔嫩艾美耳球虫的多克隆抗血清识别,表明该蛋白具有较好的反应原性.本研究结果为进一步研究该基因的生物学功能奠定了基础.

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