苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白Cry1Ba结构域Ⅱ中Loops结构与功能关系研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王广君

作者： 张杰;孙东辉;宋福平;黄大昉

作者机构：

关键词： 苏云金芽胞杆菌;Cry1Ba;Loop;基因突变

期刊名称： 生物工程学报

ISSN： 1000-3061

年卷期： 2008 年 24 卷 09 期

页码： 1631-1636

收录情况： 北大核心

摘要： 为了明确杀虫晶体蛋白中各个Loop的结构与功能的关系,以及Loop突变对Cry1Ba蛋白杀虫活性的影响,首先通过三维结构模拟以及同源序列分析的方法,找到Cry1Ba蛋白三个结构域及三个Loop相对应的氨基酸片段;然后通过重叠引物PCR将编码Cry1Ba蛋白结构域Ⅱ中的三个Loop进行了相应的突变,共获得了5个突变体M1(Loop1:340WSNTR344—缺失(Cry1A))、M2(Loop2:402Y—G)、M3(Loop2:400GIYLEP405—PSAV(Cry3A))、M4(400GIYLEPIH407—ILGS(Cry1A))、M5(Loop3:472LQSRV476—AGAVYTL(Cry1A))。将这些突变体在大肠杆菌BL21中进行了诱导表达,提取蛋白,分别对小菜蛾进行了生物活性测定。生测结果表明,Loop1的缺失突变M1的毒力,与Cry1Ba(LC500.96μg/mL)相比,显著降低,LC50为35.51μg/mL;在Loop2的突变中,单个氨基酸的突变M2(Y/G)的毒力略有下降(LC50为1.31μg/mL);而另两种突变(M3和M4)对小菜蛾的毒力明显下降,LC50值分别为11.56μg/mL、34.81μg/mL;Loop3的突变M5对小菜蛾的毒力略有提高(LC500.81μg/mL),但差异不显著。对Cry1Ba蛋白突变前后结构与功能之间关系的分析结果表明,Loop区突变对Cry1Ba蛋白的结构和功能影响非常显著;Loop1和Loop2在决定Cry1Ba对小菜蛾的毒性方面起着重要作用。

分类号： S476`Q789

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