猪伪狂犬病病毒PCR-LFD检测方法的建立及应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张莉

作者： 张莉;任卫科;李秀丽;路超;王利丽;郑丽;池晶晶;田向学;韩伟;鄢明华

作者机构：

关键词： 猪伪狂犬病病毒;聚合酶链反应;横向流动试纸条

期刊名称： 动物医学进展

ISSN： 1007-5038

年卷期： 2018 年 11 期

页码： 35-40

收录情况： 北大核心

摘要： 旨在将PCR技术与可视化的横向流动试纸条(lateral flow dipstick,LFD)相结合,建立猪伪狂犬病病毒野毒株的PCR-LFD快速检测技术。依据猪伪狂犬病病毒gE基因保守区域设计2条特异性引物和对应的特异性探针,其中下游引物和探针分别标记了荧光素(FITC)和生物素(Biotin)。通过对PCR退火温度、引物浓度、探针杂交温度的筛选,确定PCR-LFD方法的最佳反应条件,并对其敏感性、特异性和重复性进行检测。结果显示,所建立的检测方法能够特异性的检测出猪伪狂犬病病毒野毒株,与猪伪狂犬病病毒Bartha-K61株、6种对照病毒和3种对照细菌均无交叉反应,其最低检测限为100TCID50/100μL。该方法对同批次和不同批次猪伪狂犬病病毒DNA分别进行5次重复检测,结果完全一致。该方法对50份临床样品进行检测,PCR-LFD方法和病毒分离培养法检测出16份阳性样品,常规PCR检测出14份阳性样品,PCR-LFD方法的敏感性高于PCR,但两者间差异不显著P>0.05。以上结果表明,所建立的方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,且不需要琼脂糖凝胶电泳可直接判读结果,适合养殖场、基层实验室的现场检测。

分类号： S852.651

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