木薯MeSSⅢ基因的CRISPR/Cas9基因编辑载体构建及验证

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李崭

作者： 李崭;王亚杰;陆小花;李瑞梅;刘姣;符少萍;胡新文;郭建春;姚远

作者机构：

关键词： 木薯(Manihot esculenta Crantz.);淀粉合成酶;MeSSⅢ;CRISPR

期刊名称： 分子植物育种

ISSN： 1672-416X

年卷期： 2020 年 18 卷 016 期

页码： 5367-5372

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 木薯块根淀粉葡聚糖链结构是决定淀粉品质的关键因素,可溶性淀粉合成酶Ⅲ(ssⅢ)是调控植物支链淀粉葡聚糖长链合成的关键酶,木薯有两个MeSSⅢ的同源基因MeSSⅢ-1和MeSSⅢ-2.为了研究木薯MeSSⅢ对木薯块根淀粉品质形成的影响,根据MeSSⅢ-1和MeSSⅢ-2的保守区段,本研究构建了MeSSⅢ-1和MeSSⅢ-2的双基因编辑载体.利用在线软件CRISPR-P v2.0同时设计靶标MeSSⅢ-1和MeSSⅢ-2的sgNA,通过酶切连接构建重组pCAMBIAP 1301-Cas9-MeSSⅢ-gRNA质粒.将基因编辑载体转化农杆菌LBA4404后侵染木薯脆性胚性愈伤组织,筛选阳性脆性胚性愈伤组织,并提取其总DNA.通过PCR扩增靶点MeSSⅢ-1和MeSSⅢ-2的区段,并将扩增片段进行Sanger测序,分析其编辑的靶标位点.结果 发现MeSSⅢ-1和MeSSⅢ-2靶标位点被成功编辑,本研究有助于进一步获得MeSSⅢ基因突变体,以深入解析该基因在木薯淀粉合成通路中的作用.

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