木薯MeSSⅢ基因的CRISPR/Cas9基因编辑载体构建及验证

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李崭

作者： 李崭;王亚杰;陆小花;李瑞梅;刘姣;符少萍;胡新文;郭建春;姚远

作者机构： 海南大学热带作物学院;中国热带农业科学院热带生物技术研究所农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室;海南大学热带作物学院

关键词： 木薯(Manihot esculenta Crantz.);淀粉合成酶;MeSSⅢ;CRISPR

期刊名称： 分子植物育种

ISSN： 1672-416X

年卷期： 2020 年 18 卷 016 期

页码： 5367-5372

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 木薯块根淀粉葡聚糖链结构是决定淀粉品质的关键因素,可溶性淀粉合成酶Ⅲ(ssⅢ)是调控植物支链淀粉葡聚糖长链合成的关键酶,木薯有两个MeSSⅢ的同源基因MeSSⅢ-1和MeSSⅢ-2.为了研究木薯MeSSⅢ对木薯块根淀粉品质形成的影响,根据MeSSⅢ-1和MeSSⅢ-2的保守区段,本研究构建了MeSSⅢ-1和MeSSⅢ-2的双基因编辑载体.利用在线软件CRISPR-P v2.0同时设计靶标MeSSⅢ-1和MeSSⅢ-2的sgNA,通过酶切连接构建重组pCAMBIAP 1301-Cas9-MeSSⅢ-gRNA质粒.将基因编辑载体转化农杆菌LBA4404后侵染木薯脆性胚性愈伤组织,筛选阳性脆性胚性愈伤组织,并提取其总DNA.通过PCR扩增靶点MeSSⅢ-1和MeSSⅢ-2的区段,并将扩增片段进行Sanger测序,分析其编辑的靶标位点.结果 发现MeSSⅢ-1和MeSSⅢ-2靶标位点被成功编辑,本研究有助于进一步获得MeSSⅢ基因突变体,以深入解析该基因在木薯淀粉合成通路中的作用.

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