农杆菌介导甜高粱转Bt cry1Ah的研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 朱莉

作者： 郎志宏;李桂英;何康来;岳同卿;张杰;黄大昉

作者机构：

关键词： 甜高粱;cry1Ah;农杆菌转化;抗虫性

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2011 年 44 卷 10 期

页码： 1989-1996

收录情况： 北大核心

摘要： 【目的】建立一套高效、稳定的甜高粱农杆菌遗传转化体系,并在甜高粱中验证来源于苏云金芽胞杆菌新型杀虫基因cry1Ah表达产物的杀虫活性。【方法】以甜高粱幼穗愈伤组织为转化受体,通过农杆菌介导法将密码子优化过的Bt cry1Ah导入2个甜高粱品种"BABUSH"和"MN-3025"中。对获得的再生植株进行PCR检测、RT-PCR分析及除草剂抗性、目的蛋白表达水平和抗虫性鉴定分析。【结果】对336块幼穗愈伤组织块进行了农杆菌侵染,经双丙氨膦(Bialaphos)梯度筛选后共获得66株再生植株,PCR鉴定在8个转化事件中有22株为阳性植株,平均转化率为2.38%。RT-PCR检测结果表明,cry1Ah在T0甜高粱转基因植株中能够正常转录。Western blotting分析和ELISA定量测定显示,有5株可检测到Bt蛋白,但Bt蛋白含量差异较大,最高可达165.69 ng.g-1叶片鲜重(FW),最低的仅为1.93 ng.g-1叶片鲜重(FW),平均为87.50 ng.g-1 FW。饲虫试验表明,有2株转基因甜高粱植株对亚洲玉米螟(Ostrinia furnacalis)表现为抗性。【结论】利用建立的以甜高粱幼穗为外植体的农杆菌遗传转化体系,可获得具有玉米螟抗性的转基因甜高粱植株,其后代遗传稳定性还有待于进一步的研究。

分类号： S566.5

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