北京油鸡cDNA文库的构建及pur H基因的表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 郭俣

作者： 郭俣;刘长青;陆涛峰;佟春玲;修晓娜;关伟军;马月辉

作者机构：

关键词： 北京油鸡;SMARTcDNA文库;pur H基因

期刊名称： 南京农业大学学报

ISSN： 1000-2030

年卷期： 2010 年 33 卷 4 期

页码： 93-99

收录情况： CSCD

摘要： 利用SMART技术构建了北京油鸡肝脏全长cDNA文库,构建的未扩增文库滴度为1.96×10~6pfu·mL~(-1),文库重组率为92.8%,插入片段长度为1.23kb,扩增文库滴度为1.64×10~(10)pfu·mL~(-1). 设计pur H基因保守引物对该文库进行筛选,克隆了北京油鸡pur H基因(GenBank登录号: EU334506),将pur H基因完整开放阅读框定向插入pEGFP-N3,构建带有GFP报告基因重组表达载体pEGFP-N3-pur H,将其导入北京油鸡体外培养细胞中. 转染后24、48和72h,pEGFP-N3-pur H转染率为10.3%~53.2%,绿色荧光均匀分布于细胞质与细胞核中. 随表达量的增加,绿色荧光在细胞核中聚集成团块状或颗粒状. 结果表明,构建的北京油鸡肝脏组织cDNA文库符合建库要求

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