犬细小病毒VP2蛋白的表达及间接ELISA方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 易立

作者： 易立;程世鹏;王建科;柴秀丽;罗彬;张海玲;吴威;闫喜军

作者机构：

关键词： 犬细小病毒;原核表达;VP2蛋白;间接ELISA

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2010 年 30 卷 08 期

页码： 1038-1042

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 以犬细小病毒(Canine parvovirus virus,CPV)VP2基因的原核表达产物为抗原建立检测CPV抗体的间接ELISA方法。在分析CPV VP2基因稀有密码子(大肠杆菌系统)的基础上,克隆去除5′和3′端的稀有密码子的VP2基因,构建了VP2蛋白原核表达载体pET28a-VP2和pET32a-VP2,利用HIS标签对融合表达产物进行纯化。经SDS-PAGE和Western-blot检测证实该基因获得表达,并存在低相对分子质量产物,其中纯化后的pET28a-VP2具有良好的免疫学活性。以pET28a-VP2蛋白为基础,建立检测VP2抗体的i VP2-ELISA方法:抗原包被质量浓度为17.8 mg/L,血清最佳稀释度为1∶20,阳性判定标准初步定为:待测样品D值>0.367,且待测样品D值/阴性样品D值>2.0。采用i VP2-ELISA对20份背景清晰的犬血清样品进行检测,结果显示,i VP2-ELISA与HI试验的阴阳性符合率一致,但不呈现正比关系。本试验为犬场CPV抗体水平检测和进行CPV流行病学调查提供了一种简便的血清学诊断方法。

分类号： S852.65

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