木薯MeAHL31基因克隆及其在原核细胞中的表达与优化

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王元元

作者： 王元元;刘姣;王硕;符少萍;李瑞梅;姚远;胡新文;郭建春

作者机构：

关键词： 木薯;AT-hook;基因克隆;原核表达;条件优化

期刊名称： 分子植物育种

ISSN： 1672-416X

年卷期： 2019 年 05 期

页码： 1430-1437

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： AT-hook是一类含有AT-hook基序的核定位蛋白,被命名为AHL蛋白(AT-hook nuclear localized proteins),在植物生长发育、器官建成以及对激素信号和逆境胁迫响应中起重要作用。本研究通过RT-PCR克隆获得木薯MeAHL31基因,全长为1 189 bp,其中开放阅读框(ORF)为1 014 bp,编码337个氨基酸,蛋白质分子量为35.69 k D,理论等电点为5.55,GRAVY为-0.74,是一个不稳定的亲水性蛋白,在128～264 aa区间存在一个AT-hook蛋白的保守结构域PPC domain,属于AT-hook蛋白家族。我们分别将全长MeAHL31(1～1 014)和MeAHL31 (370～742)基因片段构建到pET28a原核表达载体和含麦芽糖结合蛋白(maltose binding protein, MBP)标签的pET28a-MBP载体上,并转化至E. coli BL21 (DE3)中进行诱导表达和表达条件优化。结果表明,最佳诱导表达条件是OD600=0.6,IPTG浓度为1.0 mmol/L,15℃培养16 h;含MBP融合伴侣的pET28a-MBP载体更有利于Me AHL31蛋白的可溶性表达;在同种载体中预测可溶性高的MeAHL31(370～742)区段序列较MeAHL31 (1～1 014)全长基因的可溶性蛋白表达水平更高。本研究优化高效诱导表达条件获得MeAHL31融合蛋白,为探究MeAHL31基因的生物学功能提供理论依据。

分类号： S533`Q943.2

  • 相关文献

[1]木薯MeCREB基因的分子克隆及其在原核细胞中的表达和优化. 王硕,刘姣,符少萍,段瑞军,李瑞梅,姚远,胡新文,郭建春. 2018

[2]猪繁殖候选基因Lhx8的原核表达及条件优化. 王晶晶,毛慧,陈琳,何闪,潘雪男. 2015

[3]人类多效生长因子Pleiotrophin的原核表达. 李红,刘成倩,易建中. 2016

[4]水芹HSP90基因的原核表达及条件优化. 胡艳平,蔡兴来,周曼,王敏,朱白婢,黄文枫,廖道龙,陈贻诵. 2019

[5]猪SsBHMT基因的原核表达及条件优化. 余爱丽,赵晋锋,张晏萌,张正,郭二虎. 2015

[6]川芎α-淀粉酶抑制剂基因的原核表达与条件优化. 邓楷煜,安秋菊,陈安琪,俞继华,张富丽,廖海. 2022

[7]木薯钙调蛋白的原核表达及其单克隆抗体的制备. 欧文军,余厚美,安飞飞,罗秀芹,秦于玲,陈松笔. 2017

[8]木薯14-3-3蛋白家族成员MeGRF3基因的原核表达及多克隆抗体制备. 常丽丽,王丹,彭存智,徐兵强,仝征. 2020

[9]木薯中肌醇半乳糖苷合成酶基因在大肠杆菌中的表达. 王雨晴,李瑞梅,张帆,段瑞军. 2015

[10]木薯AGPase基因的克隆与载体构建. 罗兴录,唐娟娟,许娟,袁胜勇,杨鑫. 2012

[11]木薯淀粉合成关键酶AGPase小亚基基因全长克隆. 罗兴录,陈会鲜. 2014

[12]木薯MeASR3基因的克隆及表达分析. 颜彦,铁韦韦,丁泽红,吴春来,胡伟. 2019

[13]木薯MeSnRK2-1基因克隆及表达分析. 颜彦,丁泽红,铁韦韦,吴春来,胡伟. 2018

[14]木薯MeCIPK1基因克隆及表达分析. 颜彦,铁韦韦,丁泽红,吴春来,胡伟. 2018

[15]木薯MePYL8基因克隆及表达分析. 颜彦,铁韦韦,丁泽红,吴春来,胡伟. 2018

[16]木薯MeAFP2-like基因的序列特征及表达分析. 肖亮,尚小红,单忠英,曹升,曾文丹,严华兵. 2018

[17]木薯蔗糖合酶(SuSy)基因的表达分析及SuSy1和SuSy4编码序列的克隆. 方开星,陈新,王海燕,王淑娟,马平安,王文泉. 2014

[18]木薯淀粉分支酶基因克隆及反义表达载体的构建. 余洁,郭运玲,郭安平,孔华,刘恩平,贺立卡. 2008

[19]木薯MeTCP4转录因子的克隆、表达分析及植物表达载体的构建. 雷宁,李淑霞,彭明. 2018

[20]木薯环指蛋白基因MeRFP8克隆及表达. 薛晶晶,陈松笔. 2017

作者其他论文 更多>>

微信小程序