表达抑制山羊痘病毒ORF095shRNA的山羊成纤维细胞系的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 赵志荀

作者： 赵志荀;吴国华;颜新敏;许丹;李健;朱海霞;崔力凡;高顺平;孙晓林;马保华;张强

作者机构：

关键词： 山羊痘病毒;pGPU6/GFP-shRNA;G418;细胞系;RT-PCR

期刊名称： 甘肃农业大学学报

ISSN：

年卷期： 2012 年 02 期

页码： 6-11

收录情况： CSCD

摘要： 将已经通过体外验证能够有效抑制山羊痘病毒复制的shRNA转入山羊体细胞,构建其表达细胞系.将已经通过验证能够靶向抑制山羊痘病毒ORF095基因并有效抑制GTPV的pGPU6/GFP-ORF095-siRNA-70转染山羊原代成纤维细胞,经800μg/mLG418抗性筛选7～8d后,用含200μg/mLG418和10～15ng/mLEGF的培养基进一步单克隆化并将单克隆细胞扩大、传代培养,应用RT-PCR检测及测序鉴定所构建的细胞系.结果表明:本试验获得的1株成纤维细胞系基因组含有ORF095-siRNA-70表达框架,为进一步进行体细胞克隆转基因动物的制备和RNAi体内抗山羊痘病毒的研究...

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