霍乱毒素B亚单位与胰岛素原融合基因的克隆、表达及重组蛋白特性分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 陈丽

作者： 陈丽;欧阳凤秀 ;钱炳俊;任宏 ;王强;姜庆五 ;王玉炯;刘静波;梁婉琪;张大兵

作者机构：

关键词： 霍乱毒素B亚单位;胰岛素原;融合基因CTBPROIN;神经节苷脂GM1

期刊名称： 生物工程学报

ISSN： 1000-3061

年卷期： 2005 年 21 卷 02 期

页码： 204-210

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 构建了霍乱毒素B亚单位 (CholeratoxinBsubunit,CTB)与胰岛素原 (Proinsulin)的融合基因CTB -PROIN ,将该融合基因克隆到大肠杆菌表达载体pET 30a(+)中 ,获得重组质粒pETCPI,并将该质粒转入大肠杆菌菌株BL2 1(DE3)中 ;重组菌株经IPTG诱导后 ,其表达产物经过 15 %SDS PAGE分析表明该菌株可以表达融合蛋白 ,其分子量约为 2 1. 6kD ,且主要以包涵体形式存在 ,约占全菌蛋白的 2 5 %。含CTB- PROIN重组蛋白的包涵体经过变性和复性后 ,CTB- PROIN可以在体外自组装成五聚体结构。Westernblotting分析结果表明重组CTB PROIN蛋白可分别被霍乱毒素的抗体和胰岛素的抗体识别 ,说明该蛋白具有霍乱毒素和胰岛素的双重抗原性。同时在体外 ,CTB PROIN蛋白可与神经节苷脂GM1(monosialoganglioside)特异性结合 ,表明了该融合蛋白在体外具有生物活性。这些研究结果为利用原核生物表达系统研制廉价、高效的I型糖尿病口服疫苗奠定了基础。

分类号： R587.1

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[2]霍乱毒素B亚单位与胰岛素B链融合基因的克隆及原核表达分析. 陈丽,欧阳凤秀,钱炳俊,任宏,王强,姜庆五,王玉炯,刘静波,梁婉琪,潘爱虎. 2005

[3]人胰岛素原基因在大肠杆菌中的表达和纯化. 张晓玮,彭振英,陈高,郑玲,于金慧,毕玉平,边斐. 2015

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