文献类型： 中文期刊
第一作者： 柴慧萍
作者： 柴慧萍;刘光远;张林;龚真莉;谢俊仁;田占成;贾宁
作者机构：
关键词： 长角血蜱;雌蜱;cDNA表达文库;免疫学筛选
期刊名称： 中国寄生虫学与寄生虫病杂志
ISSN： 1000-7423
年卷期： 2009 年 27 卷 01 期
页码： 6-10
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 目的构建长角血蜱饥饿雌蜱cDNA表达文库,筛选长角血蜱功能性抗原基因。方法在无RNA酶污染的条件下提取长角血蜱总RNA,进而纯化mRNA,以寡脱氧胸腺核苷酸[oligo(dT)]为引物合成双链cDNA,并在其两端加EcoRⅠ/HindⅢ定向接头。将cDNA分子定向克隆至具有EcoRⅠ/HindⅢ黏性末端的λSCREEN载体。用噬菌体包装蛋白对以上连接产物进行体外包装以形成完整的噬菌体,转化大肠埃希菌(Escherichia coli)ER1647,从而构建长角血蜱饥饿雌蜱cDNA表达文库。使用兔抗长角血蜱全蜱血清对该文库进行免疫学筛选,经过2次筛选得到的阳性噬菌体转化E.coli BM25.8亚克隆为重组质粒,转化E.coli JM109,提取重组质粒进行PCR和测序分析。结果长角血蜱饥饿雌蜱cDNA表达文库的基础库容量为1.8×106pfu,重组率为100%,扩增后的滴度为2.4×109pfu/ml。筛选获得42个阳性克隆,序列分析表明有12个新cDNA序列,其编码蛋白与长角血蜱原肌凝蛋白、环状扇头蜱幼蜱未知蛋白、黑腹果蝇染色体2R、褐黄血蜱线粒体DNA、青海血蜱HqL09、Hq05和肌球蛋白轻链mRNA等具有同源性。结论构建了长角血蜱饥饿雌蜱cDNA表达文库,获得的阳性克隆为长角血蜱功能性抗原的研究奠定基础。
分类号： R384.41
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