单域抗体T7噬菌体展示文库构建与鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 徐海

作者： 徐海;王健;郭长明;董洪燕;邓碧华;侯继波

作者机构：

关键词： 羊驼;纳米抗体;T7噬菌体;表面展示

期刊名称： 浙江农业学报

ISSN： 1004-1524

年卷期： 2021 年 33 卷 001 期

页码： 27-33

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 优化噬菌体展示文库构建策略,获得高品质羊驼源天然纳米抗体T7噬菌体展示文库,并对文库质量进行鉴定.分离羊驼外周血淋巴细胞,提取总RNA,RT-PCR扩增羊驼重链抗体可变区(VHH)基因,插入T7 select 415-1b噬菌体载体构建文库,计算文库的库容量,测定文库传代稳定性.测序分析VHH基因的多样性和纳米抗体氨基酸序列特征.Western-blot检测纳米抗体在噬菌体表面的表达情况,电镜观察文库中重组噬菌体颗粒形态.结果表明,构建羊驼源纳米抗体T7噬菌体展示文库,有效库容达到2.73×109 PFU;纳米抗体与羊驼源抗体同源性高,氨基酸序列显示纳米抗体特征区域,并其在噬菌体表面高拷贝表达;重组噬菌体颗粒结构完整,但随着传代出现插入基因的丢失.

分类号： Q939.48

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